具有异源抗原的活的减毒黄病毒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111683679A(43)申请公布日2020.09.18(21)申请号201880074973.6(74)专利代理机构中国贸促会专利商标事务所有限公司1(22)申请日2018.10.051038代理人李程达(30)优先权数据1716254.62017.10.05GB(51)Int.Cl.A61K39/12(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C07K14/005(2006.01)2020.05.20(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2018/0771572018.10.05(87)PCT国际申请的公布数据WO2019/068877EN2019.04.11(71)申请人勒芬天主教大学地址比利时勒芬(72)发明人R·布德维恩斯K·达迈尔J·内茨权利要求书3页说明书19页序列表20页附图7页(54)发明名称具有异源抗原的活的减毒黄病毒(57)摘要本发明涉及包含黄病毒序列的多核苷酸，其前面是编码黄病毒衣壳蛋白的N末端部分，免疫原性蛋白或其包含免疫原性肽的部分以及2A切割肽的序列，以及由这样的序列编码的病毒。本发明还涉及这样的多核苷酸和病毒作为疫苗的用途。CN111683679ACN111683679A权利要求书1/3页1.包含黄病毒序列的多核苷酸，其特征在于编码所述黄病毒的核苷酸序列前面是编码以下的序列：-黄病毒衣壳蛋白的部分，其包含黄病毒衣壳蛋白的N末端部分或由黄病毒衣壳蛋白的N末端部分组成，-免疫原性蛋白质，或其包含免疫原性肽的部分，以及-2A切割肽。2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述黄病毒衣壳蛋白的部分包含黄病毒衣壳蛋白的21个N末端氨基酸或由黄病毒衣壳蛋白的21个N末端氨基酸组成。3.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其中编码衣壳基因的N末端部分的核苷酸序列与全长病毒序列中的相应序列相比具有一个或多个同义密码子。4.根据权利要求1、2或3所述的多核苷酸，其中所述黄病毒是黄热病病毒。5.根据权利要求1-4中任一项所述的多核苷酸，其中黄热病病毒衣壳的末端部分由序列MSGRKAQGKTLGVNMVRRGVR(SEQIDNO：2)组成。6.根据权利要求1-5中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽包含序列DXEXNPGP[SEQIDNO：46]。7.根据权利要求1-5中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽包含序列LxxxGDVExPGP[SEQIDNO：17]。8.根据权利要求1至7中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽包含序列LLTCGDVEENPGP[SEQIDNO：18]。9.根据权利要求1至8中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽是具有氨基酸序列EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQIDNO：16)的Thoseaasigna2A肽。10.根据权利要求1至9中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽的C末端氨基酸是Gly、Ala、Ser或Thr。11.根据权利要求1至10中任一项所述的多核苷酸，其中所述免疫原性蛋白质是T细胞抗原且其免疫原性片段包含T细胞表位。12.根据权利要求1至11中任一项所述的多核苷酸，其中编码所述免疫原性蛋白质或其片段的序列的5'的编码衣壳蛋白的核苷酸序列具有野生型黄病毒的核苷酸序列。13.根据权利要求1至11中任一项所述的多核苷酸，其中所述免疫原性蛋白质或其免疫原性片段的密码子使用适合于在细菌中表达。14.根据权利要求1至12中任一项所述的多核苷酸，其中具有同义密码子的序列是：atgtctggtcgtaaagctcagggaaaaaccctgggcgtcaatatggtacgacgaggagttcgc(SEQIDNO：14)和agcggccgcaaagcccagggtaagacactgggcgtgaacatggttcgtcgcggcgtccgg(SEQIDNO:15)。15.根据权利要求1至14中任一项所述的多核苷酸，其中所述黄热病病毒是YF17D减毒病毒。16.根据权利要求1至15中任一项所述的多核苷酸，其是细菌人工染色体(BacterialArtificialChromosome)。2CN111683679A权利要求书2/3页17.根据权利要求16所述的多核苷酸，其中所述BAC包含用于将所述BAC扩增至每个细菌细胞超过10个拷贝的诱导型细菌ori序列以及病毒表达盒，该病毒表达盒包含所述多核苷酸的cDNA并包含用于在哺乳动物细胞中转录所述病毒cDNA和用于将转录的RNA加工成感染性RNA病毒的顺式调节元件。18.根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸，其中所述T细胞抗原选自由HBC核心抗原、OVA和EBNA1组成的组。19.根据权利要求1至18中任一项所述的多核苷酸