木糖代谢酵母.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112004930A(43)申请公布日2020.11.27(21)申请号201980022435.7(74)专利代理机构北京市中咨律师事务所(22)申请日2019.03.2711247代理人黄革生林柏楠(30)优先权数据62/648,6192018.03.27US(51)Int.Cl.C12N15/52(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N9/92(2006.01)2020.09.25C12P7/10(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据C12P7/06(2006.01)PCT/EP2019/0577532019.03.27(87)PCT国际申请的公布数据WO2019/185737EN2019.10.03(71)申请人巴斯夫欧洲公司地址德国莱茵河畔路德维希港(72)发明人徐浩文D·萨托里C·杰克逊权利要求书2页说明书10页序列表78页附图12页(54)发明名称木糖代谢酵母(57)摘要本发明涉及微生物，尤其是酵母，其已用一个或多个表达构建体转化，该表达构建体用于：i)过表达编码木糖激酶(XKS1)、转醛酶(TAL1)、转酮酶1(TKL1)和转酮酶2(TKL2)的天然基因；和ii)表达编码木糖异构酶(XI)的功能性异源基因，其中木糖异构酶(XI)基因源自选自那不勒斯栖热袍菌、安达杆菌和克莱弗雷梭菌的微生物。本发明还涉及表达构建体，用本发明的微生物发酵戊糖的方法，以及产生此类微生物的方法。CN112004930ACN112004930A权利要求书1/2页1.微生物，尤其是酵母，优选已用一种或多种用于以下的表达构建体转化的酿酒酵母物种：i)过表达编码木酮糖激酶(XKS1)、转醛酶(TAL1)、转酮酶1(TKL1)和转酮酶2(TKL2)的天然基因和ii)表达编码木糖异构酶(XI)的功能性异源基因，其中木糖异构酶(XI)基因源自选自那不勒斯栖热袍菌、安达杆菌和克莱弗雷梭菌的微生物。2.根据权利要求1的微生物，其中木糖异构酶(XI)由与SEQIDNo21、SEQIDNo5或SEQIDNo25具有至少66％、优选至少80％、更优选至少90％和最优选至少95％序列同一性的核酸序列编码。3.根据权利要求1或2的微生物，其中木糖异构酶(XI)表示为与SEQIDNo22、SEQIDNo6或SEQIDNo26具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％的序列同一性的氨基酸序列。4.根据前述权利要求中任一项的微生物，其中木酮糖激酶(XKS1)由与SEQIDNo74具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码，转醛酶(TAL1)由与SEQIDNo77具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码，转酮酶1(TKL1)由与SEQIDNo80具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码，转酮酶2(TKL2)由与SEQIDNo83具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码。5.根据前述权利要求中任一项的微生物，其中编码木酮糖激酶(XKS1)、转醛酶(TAL1)、转酮酶1(TKL1)、转酮酶2(TKL2)和木糖异构酶(XI)的基因中的每一个在组成型启动子的控制下，其中该组成型启动子选自由与SEQIDNo73具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码的TDH3，由与SEQIDNo76具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码的PGK1，由与SEQIDNo79具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码的CYC19，由与SEQIDNo82具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码的PFK1，由与SEQIDNo90具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码的截短HXT7，和由与SEQIDNo85具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％和最优选至少99％序列同一性的核酸序列编码的TEF。6.表达构建体，其用于表达编码源自选自那不勒斯栖热袍菌(T.neapolitana)、安达杆菌(A.andensis)和克莱弗雷梭菌(C.clariflavum)的微生物的木糖异构酶(XI)的基因，其中木糖异构酶(XI)基因在酿酒酵母的组成型启动子的控制下。7.根据权利要求6的表达构建体，其中编码木糖异构酶(XI)的基因表示为与SEQ