信使RNA的包封.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114344275A(43)申请公布日2022.04.15(21)申请号202111249662.9A61K9/127(2006.01)(22)申请日2015.07.02A61K31/713(2006.01)(30)优先权数据62/020,1632014.07.02US(62)分案原申请数据201580033224.52015.07.02(71)申请人川斯勒佰尔公司地址美国马萨诸塞州(72)发明人F·德罗莎S·卡夫M·哈特莱因(74)专利代理机构北京市君合律师事务所11517代理人吴瑜顾云峰(51)Int.Cl.权利要求书3页说明书26页A61K9/50(2006.01)序列表9页附图3页(54)发明名称信使RNA的包封(57)摘要本发明提供了一种用于脂质纳米颗粒配制和mRNA包封的改良方法。在一些实施方案中，本发明提供了一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，其包括混合mRNA溶液和脂质溶液的步骤，其中所述mRNA溶液和/或所述脂质溶液处于大于环境温度的预定温度下。CN114344275ACN114344275A权利要求书1/3页1.一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，其包括混合mRNA溶液和脂质溶液的步骤，其中所述mRNA溶液和/或所述脂质溶液处于大于环境温度的预定温度下。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述预定温度为等于或大于约30℃、37℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃或70℃。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述预定温度介于约25‑70℃、约30‑70℃、约35‑70℃、约40‑70℃、约45‑70℃、约50‑70℃或约60‑70℃的范围内。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预定温度为约65℃。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液和所述脂质溶液在混合前分别被加热至所述预定温度。6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中在混合之前，所述mRNA溶液被加热至所述预定温度且所述脂质溶液处于环境温度下。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过将环境温度下的mRNA储备溶液添加到加热的缓冲溶液中达到所述预定温度而将所述mRNA溶液加热至所述预定温度。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述缓冲溶液具有不大于约4.5的pH。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过无脉流泵混合所述mRNA溶液和所述脂质溶液。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述泵是齿轮泵。11.根据权利要求9所述的方法，其中所述泵是离心泵。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在介于约150‑250ml/分钟、250‑500ml/分钟、500‑1000ml/分钟、1000‑2000ml/分钟、2000‑3000ml/分钟、3000‑4000ml/分钟或4000‑5000ml/分钟的范围内的流速下混合所述mRNA溶液。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在约200ml/分钟、约500ml/分钟、约1000ml/分钟、约2000ml/分钟、约3000ml/分钟、约4000ml/分钟或约5000ml/分钟的流速下混合所述mRNA溶液。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在介于约25‑75ml/分钟、约75‑200ml/分钟、约200‑350ml/分钟、约350‑500ml/分钟、约500‑650ml/分钟、约650‑850ml/分钟或约850‑1000ml/分钟的范围内的流速下混合所述脂质溶液。15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在约50ml/分钟、约100ml/分钟、约150ml/分钟、约200ml/分钟、约250ml/分钟、约300ml/分钟、约350ml/分钟、约400ml/分钟、约450ml/分钟、约500ml/分钟、约550ml/分钟、约600ml/分钟、约650ml/分钟、约700ml/分钟、约750ml/分钟、约800ml/分钟、约850ml/分钟、约900ml/分钟、约950ml/分钟或约1000ml/分钟的流速下混合所述脂质溶液。16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括首先通过混合柠檬酸盐缓冲液与mRNA储备溶液产生所述mRNA溶液的步骤。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述柠檬酸盐缓冲液包含约10mM柠檬酸盐、约150mMNaCl、约4.5的pH。18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述mRNA储备溶液包含浓度等于或大于约1mg/ml、约10mg/ml、约50mg/ml、约100mg/ml的mRNA。19.根据权利要求16至18中任一项所述的方法，其中在介于约100‑300ml/分钟、