信使RNA 5’端引入的两个RNA序列取代信使RNA帽.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112567046A(43)申请公布日2021.03.26(21)申请号201980040513.6(74)专利代理机构北京戈程知识产权代理有限(22)申请日2019.05.15公司11314代理人程伟程云(30)优先权数据18540522018.05.15FR(51)Int.Cl.C12Q1/6865(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N15/67(2006.01)2020.12.16C12N15/115(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据C12P19/34(2006.01)PCT/FR2019/0511032019.05.15C12P21/02(2006.01)(87)PCT国际申请的公布数据WO2019/220058FR2019.11.21(71)申请人梅辛杰生物制药地址法国里奥姆(72)发明人J·勒穆瓦安权利要求书1页说明书28页序列表26页附图11页(54)发明名称信使RNA5’端引入的两个RNA序列取代信使RNA帽(57)摘要本发明涉及缺少帽分子的信使核糖核酸(mRNA)分子，因其在体外转录合成的成本大大降低，其从5'至3'端包含：至少一个拷贝的对Xrn1外切核酸酶具有抗性的GUCAGRYC(N7‑19)GCCA(N2‑19)UGCNRYCUG共有序列、一个拷贝的内部核糖体进入位点(IRES)RNA序列、以及开放阅读相(unephase)。CN112567046ACN112567046A权利要求书1/1页1.一种缺少帽分子的信使核糖核酸(ARNm)分子，其从5'至3'包含：‑5'‑UTR区域，包含至少一个拷贝的GUCAGRYC(N7‑19)GCCA(N12‑19)UGCNRYCUG(xrRNA)共有序列；‑一个拷贝的内部核糖体进入位点(IRES)ARN序列；和‑开放阅读框。2.根据权利要求1所述的ARNm分子，其包含两个拷贝的xrRNA。3.根据权利要求1或2所述的ARNm分子，其包含SEQIDNO:1至44中的至少一个SEQIDNO，优选包含SEQIDNO：11和SEQIDNO：26。4.根据权利要求1至3中任一项所述的ARNm分子，其包含脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES序列。5.根据权利要求1至4中任一项所述的ARNm分子，其包含茎‑环，优选根据SEQIDNO:87，所述茎‑环位于5'‑UTR区域的5'端。6.根据权利要求1至5中任一项所述的ARNm分子，其包含选自具有SEQIDNO：64序列的适体A和具有SEQIDNO：66序列的适体C的至少一个适体。7.一种ARNm分子，其包含根据权利要求6所述的适体A，其中所述ARNm分子结合至融合多组氨酸标签的细胞穿透肽(CPP)，所述CPP优选选自具有SEQIDNO：75序列的M12‑H6、具有SEQIDNO：76序列的CPP1‑H6、具有SEQIDNO：77序列的CPP2‑H6、以及具有SEQIDNO：78序列的CPP3‑H6。8.根据权利要求1至7中任一项所述的ARNm分子，其中开放阅读框编码HRV2病毒的2Apro蛋白。9.一种脱氧核糖核酸(ADN)分子，其包含编码前述权利要求中任一项所述的ARNm的序列，优选包含：‑T7ARN聚合酶识别的启动子，所述启动子包含由SEQIDNO:46所示的序列；‑5'‑UTR区域，其包含由SEQIDNO：50、71、72、73、85、或86所示的序列；‑开放阅读框；和‑3'‑UTR区域，其包含选自SEQIDNO：53、54、55和56所示序列的序列。10.一种载体，其包含权利要求1至5中任一项所述的ARNm分子或权利要求9所述的ADN。11.一种用于生产至少一种ARNm的体外方法，其包括使权利要求9所述的ADN分子接触至少一种ARN聚合酶。12.根据权利要求11所述的生产方法，其包括纯化所述ARNm的步骤。13.一种药学上可接受的组合物，其包含权利要求1至7中任一项所述的ARNm和生理上可接受的赋形剂和/或佐剂。14.根据权利要求13所述的组合物在基因疗法或遗传接种中的用途。15.根据权利要求13或14所述的组合物，其包含权利要求1至7中任一项所述的第二ARNm分子，其中开放阅读框编码2Apro蛋白。2CN112567046A说明书1/28页信使RNA5’端引入的两个RNA序列取代信使RNA帽技术领域[0001]本发明涉及核糖核酸领域，更具体地涉及信使核糖核酸(ARNm)的体外合成、其稳定性以及其翻译成多肽，特别是在转染细胞中。背景技术[0002]ARNm是在工业规模上生产多肽的重要分子。它的稳定性以及转录和翻译效率强烈地影响多肽的下游产量，以及由此而来的成本。[0003]ARNm也是在基因疗法和遗传接种中所使用