【精编医学资料】BCA法测蛋白浓度.docx

【目的】：掌握BCA法测定蛋白质浓度的原理。【原理】：BCA(bicinchoninincacid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿即BCA工作试剂。在碱性条件下BCA与蛋白质结合时蛋白质将Cu2+还原为Cu+一个Cu+螯合二个BCA分子工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。【操作】标准曲线的绘制：取试管七支、编号按下表操作：【计算】（一）绘制标准曲线。（二）以测定管吸光度值查找标准曲线求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。（三）再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。【优缺点】(一)操作简单快速45分钟内完成测定比经典的Lowary法快4倍且更加方便；(二)准确灵敏试剂稳定性好BCA试剂的蛋白质测定范围是20-200μg/ml微量BCA测定范围在0.5-10μg/ml。(三)经济实用除试管外测定可在微板孔中就进行大大节约样品和试剂用量；(四)抗试剂干扰能力比较强如去垢剂尿素等均无影响【器材】（一）7220型分光光度计（二）恒温水浴箱（三）中试管7支（四）枪式移液管【试剂】1、试剂A：1％BCA二钠盐2％无水碳酸钠0.16%酒石酸钠0.4％氢氧化钠0.95％碳酸氢钠混合调PH值至11.25。2、试剂B：4％硫酸铜。3、BCA工作液：试剂A100ml＋试剂B2ml混合。4、蛋白质标准液：用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml的蛋白质标准液。（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定）5、待测样品：用双缩脲测定法的样品稀释而成。此法测定蛋白质浓度近些年被科研工作者广泛选用。目前BCA法的试剂盒市面有售。总之虽然蛋白质含量的测定方法很多但是还没有一个完美的方法。在选择测定方法时可根据实验要求和实验室条件决定。内容总结（1）【目的】：掌握BCA法测定蛋白质浓度的原理（2）(三)经济实用除试管外测定可在微板孔中就进行大大节约样品和试剂用量（3）（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定）5、待测样品：用双缩脲测定法的样品稀释而成（4）总之虽然蛋白质含量的测定方法很多但是还没有一个完美的方法