乳铁蛋白的分离工艺研究.doc

乳铁卵白的不离工艺研讨牛初乳是指奶牛产犊后3d内所排泄的乳汁。迷信研讨证明牛初乳是天然界因子最为富集的生物质源之一。包含主要的免疫因子跟成长因子如免疫球卵白（IgG）、乳铁卵白（LF）及胰岛素成长因子（IGF）等含量比常乳高10～100倍。这些心理活性身分存在免疫调理、延缓朽迈、增进成长发育、克制肿瘤等生物功用不只能够制作功用保健食物而且还存在开辟天然活性生物药物的宏年夜潜力。乳铁卵白又称“乳转铁卵白”是一种糖卵白属于转铁卵白家属。LF的一级构造是一条多肽链分子量为70～80kDLF上联合有两条糖链含量为7%阁下其构成包含有半乳糖、甘露糖、N－乙酰半乳糖胺、藻糖等。LF存在多种生物活性如增进铁的接收、抑菌抗病毒、增进细胞增殖、调理骨髓细胞天生、调理补体零碎、安慰溶菌酶再生、避免脂质过氧化等。在牛初乳中乳铁卵白的含量为1.00mg/ml比常乳高近50倍。我国约有乳牛近430万头此中成年母牛260万头以每头乳牛年产初乳50kg盘算每年可产近130t乳铁卵白因而消费乳铁卵白的质料极为丰厚它的开辟应用将带来可不雅的经济效益跟社会效益。但牛初乳存在异味及稀薄度年夜难于加工处置的特色除豢养牛犊之外应用率特不低。初乳本身所存在的潜伏代价得不到充沛的反应。因而高效综合应用牛初乳资本开收回公道的分离技巧道路以提取高纯度、高活性的天然活性卵白质特不是开辟作物药质料有特不主要的理想意思。本试验室经过离子交流色谱技巧胜利地从初乳中不离出了高纯度的乳铁卵白并对此不离进程做了恰当的优化抵达了低本钱不离高纯度乳铁卵白的目标。1质料与东西1.1质料与试剂牛初乳：乳牛产犊3ｄ内搜集的样品CM-SephadexC-50：出口分装BMK（Shanghai）Sci&TechLtdCM-SEPHAROSEFASTFLOWLF规范样品、电泳级丙稀酰胺Acr、电泳级甲叉双丙稀酰胺Bis、剖析纯Tris碱（三羟甲基氨基甲烷）化学纯SDS（十二烷基磺酸钠）剖析纯TEMED（四甲基乙二胺）过硫酸胺Ap剖析纯甘氨酸考马斯亮蓝1.2试验仪器R-250等。SBS-100数控计滴主动局部搜集器、HD-21-88核酸卵白检测仪、3057PORTABLERECORDER、BT01-100兰格恒流泵、TH-500梯度混杂器、PHS-25型pH计、DYY-8B型稳压稳流电泳仪、DYⅢ28A型电泳槽、751G分光光度计、TDL-5000B冷冻离神思。2试验办法2.1不离办法2.1.1凝胶的预处置取液体胶与去离子水1：1混杂浸泡沉落装柱。以2BV的流速先用碱洗2.5h（5倍胶体积）用去离子水洗至pH值为7.0阁下用酸洗2.5h用水洗至pH值为7.0阁下再用碱洗2.5h后用水洗至pH值7.0阁下备用。2.1.2牛初乳的脱脂取新颖牛初乳在冷冻离神思中离心30min（4800r/min1～5℃）去下层油脂。2.1.3阶跃洗脱的办法在4℃前提下静态上柱吸附8h。去离子水以1BV的流速洗柱约10h待基线走平用1.6%NaCl洗脱约需5h时期杂卵白被洗脱上去待基线再度走平运用洗脱产品为LF（粉白色）出峰时刻为1h阁下。洗脱曲线见图1。5.0%NaCl洗脱2.1.4CM-SEPHAROSEFASTFLOW的穿透曲线（图2）在试验中应用纯度为97%规范样品配制浓度为4.80g/l的LF溶液在约5BV流速下测定胶体积为62ml的CM-SEPHAROSEFASTFLOW的穿透曲线。依照洗脱记载可盘算掉掉在穿透点抵达前CM-SEPHAROSEFASTFLOW的实践吸附容量为2g阁下。2.1.5透析取洗脱液于透析袋放在蒸馏水中24h两头每8h换一次水撤除洗脱液中的盐类小分子。2.1.6枯燥冷冻枯燥法此法对乳铁卵白的生物活性丧掉小。2.2剖析办法2.2.1卵白质测定用核酸卵白检测仪测定卵白质。2.2.2乳铁卵白纯度的剖析用HPLC法跟凝胶电泳法进展纯度剖析。3后果与剖析3.1交流剂的选择依照乳铁卵白的特征本试验选用弱酸性阳离子交流剂并选用Na型交流剂作为储存、吸附时的离子型。比拟了离后果。CM-SEPHADEXC-50跟CM-SEPHAROSEFASTFLOW2种树脂的分从表1能够看出一样单元量的牛初乳质料进展试验CM-SEPHADEXC-50跟CM-SEPHAROSEFASTFLOW比拟洗脱掉掉的LF的量跟纯度都相差不年夜只是CM-SEPHADEXC-50掉掉的洗脱液呈较深粉白色而用CM-SEPHAROSEFASTFLOW洗脱得到的洗脱液色彩略浅一些。运用一样的装柱办法时CM-SEPHAROSEFASTFLOW比CM-SEPHADEXC-50更轻易操作且在试验进程中体积不会发作变更后果也有相称水平的妨碍故后继试验选用3.2吸附办法的选择（见图3）有利于完成产业化消费。同时因为装柱进程对洗脱CM-SEPHAROSEFAST