【精编医学资料】仔猪副伤寒活疫苗.pptx

仔猪副伤寒活疫苗〔C500株〕生产操作细那么本品系使用免疫原性良好的猪霍乱沙门氏菌弱毒株接种适宜培养基培养收获培养物参加适当稳定剂经真空冷冻枯燥制成。本品用于预防仔猪副伤寒活疫苗。1、菌种1.1疫苗生产用菌种为猪霍乱沙门氏菌C500弱毒株原种购于中国兽药检查所经扩繁后由质检部鉴定、保管、供给。1.2菌种标准1.2.1C500弱毒株应符合以下标准1.2.1.1形态和生化特性本菌为革兰氏阴性小杆菌生化特性应符合细菌分类学中本菌的特性。1.2.1.2培养特性在普通琼脂平板上37℃培养18-22小时菌落为圆形、边缘整齐、突起、半透明、略湿润的光滑型。1.2.1.3血清学特性普通琼脂新鲜培养物用玻片凝集检查法对沙门氏菌属O7因子血清出现凝集反响。1.2.1.4特异性在含1%的醋酸铊的普通肉汤中呈均匀浑浊生长用新鲜普通琼脂培养物与1\500%吖啶黄溶液做玻片凝集试验应不出现凝集反响。1.2.1.5平安性用pH7.4-7.6的普通肉汤或蛋白胨水将培养24-48小时的普通琼脂斜面培养物洗下并作活菌计数注射以下动物应符合标准。小白鼠18-22g〔30-35日龄〕的小白鼠10只各皮下注射0.2ml含活菌数1亿观察21日至少应存活9只。家兔体重1.5-2.0kg的家兔5只各皮下注射1ml含活菌数100亿观察21日应存活。仔猪用体重15kg以上的健康易感断奶仔猪4头各静脉注射1ml含活菌数30亿观察1个月应存活。1.3冻干菌种2-8℃保存期为10年。2、疫苗制造及半成品检验2.1生产用菌种的制备2.1.1一级种子繁殖和鉴定冻干种子用普通肉汤稀释或经普通肉汤后接种普通琼脂平板37℃培养18-20小时观察菌落形态菌落为圆形、边缘整齐、突起、半透明、略湿润的光滑型。选取中等偏大的菌落5-10个混合后接种于普通琼脂斜面假设干只37℃培养24小时经纯粹检验合格并用0.2%吖啶黄溶液做玻片凝集试验应合格作为一级种子。在2-8℃保存期不超过1个月在此期间可以移植1-2次在培养基上继代不超过5代。2.1.2二级种子繁殖取一级种子接种于普通琼脂或普通肉汤37℃培养24小时经纯粹检验合格后即可作为生产种子在2-8℃保存期不超过2日。2.2制苗用培养基制备2.2.1材料牛肉要求应采购新鲜的精牛肉3-5岁前后腿、胸部尽量少含脂肪、肌腱、筋膜等。鱼蛋白胨1.5%胰蛋白胨0.5%氯化钠0.5%氢氧化钠水2.2.2制备方法将新鲜的精牛肉去掉脂肪、筋膜等绞碎纯化水低温浸泡24小时100℃煮沸2小时补足失去的水分冷却静止沉淀24小时抽取上清液参加鱼蛋白胨、胰蛋白胨、氯化钠溶化用氢氧化钠溶液调整pH值至7.8煮沸20分钟降温静止沉淀。3.1条件准备3.1.1根据菌液制备所需物品及设备条件进行全面准备。3.1.2按使用时间提前做好对发酵罐空消工作包括罐体、空气过滤系统、各个进出料口确保灭菌无死角。将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。3.1.3在工作开始前30～40min按净化级别要求调整送风量到达洁净级别要求。3.1.4提前一天对发酵罐进行全面灭菌并保持发酵罐正压。3.2进料及培养基灭菌将配制好的培养基通过管道打入发酵罐参加消泡剂〔猪油〕然后对进料管道进行清洗、灭菌关闭进料阀门对培养基及所有的进出口、空气过滤系统进行灭菌当温度到达90℃和100℃时分别经上面空气进管和下面放料口向罐内通入蒸汽1分钟左右罐内116℃保持40分钟其他位置121℃保持40分钟。灭菌结束后马上夹层通冷水进行降温并及时补充无菌空气保持罐内正压。当温度降至40℃时关闭冷水管道停止降温通无菌空气保持罐内正压翻开自动控温系统的阀门和开关温度控制在37℃。3.3接种在火焰保护下连接种子瓶和发酵罐接种口翻开发酵罐出气阀关小发酵罐进气阀使罐内压力接近于0确认无误后翻开接种阀门利用正压空气将二级种子按1%-2%的接种量接种于普通肉汤中然后按2.5%参加40%灭菌葡萄糖溶液。3.4发酵培养接种后先小气量通入无菌空气2h然后逐渐加大通气量每2h增加通气量培养后期每小时测定一次pH当pH上升到7.8时参加40%葡萄糖溶液2000ml调整pH培养18～20小时当菌数将要到达最顶峰时停止培养收获菌液将菌液放入灭菌大玻璃瓶中。4、配苗将事先准备好的冻干保护剂参加收苗瓶中摇匀保护剂和菌液的比例是1:7明胶和蔗糖的最终含量分别是1.3%和5%。配苗完成后马上进行分装和冻干。本卷须知：1、培养基是菌苗生产的关键一定要把握好原材料的质量。2、发酵罐灭菌时应注意千万不要留有死角通气管道压力应高于罐内压力不要造成培养基倒吸入空气过滤器。3、通气培养时应认真仔细10小时后每小时要测