医学专题—仔猪副伤寒活疫苗...ppt

仔猪副伤寒活疫苗（C500株）生产(shēngchǎn)操作细则本品系使用免疫原性良好(liánghǎo)的猪霍乱沙门氏菌弱毒株，接种适宜培养基培养，收获培养物加入适当稳定剂，经真空冷冻干燥制成。本品用于预防仔猪副伤寒活疫苗。1、菌种
1.1疫苗生产用菌种为猪霍乱沙门氏菌C500弱毒株，原种购于中国兽药检查所，经扩繁后由质检部鉴定、保管(bǎoguǎn)、供应。
1.2菌种标准
1.2.1C500弱毒株应符合以下标准
1.2.1.1形态和生化特性本菌为革兰氏阴性小杆菌，生化特性应符合细菌分类学中本菌的特性。1.2.1.2培养特性在普通琼脂平板上，37℃培养18-22小时，菌落为圆形、边缘整齐、突起、半透明、略湿润的光滑型。
1.2.1.3血清学特性普通琼脂新鲜(xīnxiān)培养物用玻片凝集检查法，对沙门氏菌属O7因子血清出现凝集反应。1.2.1.4特异性在含1%的醋酸铊的普通肉汤中呈均匀浑浊生长，用新鲜普通琼脂培养物与1\500%吖啶黄溶液(róngyè)做玻片凝集试验应不出现凝集反应。
1.2.1.5安全性用pH7.4-7.6的普通肉汤或蛋白胨水，将培养24-48小时的普通琼脂斜面培养物洗下并作活菌计数，注射下列动物应符合标准。小白鼠18-22g（30-35日龄）的小白鼠10只，各皮下注射0.2ml，含活菌数1亿，观察21日，至少应存活9只。
家兔体重1.5-2.0kg的家兔5只，各皮下注射1ml，含活菌数100亿，观察21日应存活。
仔猪用体重15kg以上的健康易感断奶(duànnǎi)仔猪4头，各静脉注射1ml，含活菌数30亿，观察1个月应存活。1.3冻干菌种2-8℃保存期为10年。
2、疫苗制造及半成品检验
2.1生产用菌种的制备
2.1.1一级种子繁殖和鉴定
冻干种子用普通肉汤稀释或经普通肉汤后，接种普通琼脂平板，37℃培养18-20小时(xiǎoshí)，观察菌落形态，菌落为圆形、边缘整齐、突起、半透明、略湿润的光滑型。选取中等偏大的菌落5-10个，混合后接种于普通琼脂斜面若干只，37℃培养24小时，经纯粹检验合格(hégé)，并用0.2%吖啶黄溶液做玻片凝集试验应合格(hégé)，作为一级种子。在2-8℃保存期不超过1个月，在此期间可以移植1-2次，在培养基上继代不超过5代。
2.1.2二级种子繁殖取一级种子接种(jiēzhòng)于普通琼脂或普通肉汤，37℃培养24小时，经纯粹检验合格后，即可作为生产种子，在2-8℃保存期不超过2日。2.2制苗用培养基制备
2.2.1材料
牛肉要求应采购新鲜(xīnxiān)的精牛肉，3-5岁，前后腿、胸部，尽量少含脂肪、肌腱、筋膜等。
鱼蛋白胨1.5%
胰蛋白胨0.5%
氯化钠0.5%
氢氧化钠
水2.2.2制备方法
将新鲜的精牛肉去掉脂肪(zhīfáng)、筋膜等绞碎，纯化水低温浸泡24小时，100℃煮沸2小时，补足失去的水分，冷却静止沉淀24小时，抽取上清液，加入鱼蛋白胨、胰蛋白胨、氯化钠溶化，用氢氧化钠溶液调整pH值至7.8，煮沸20分钟，降温静止沉淀。3.1条件准备
3.1.1根据菌液制备所需物品及设备条件，进行全面准备。
3.1.2按使用(shǐyòng)时间，提前做好对发酵罐空消工作，包括罐体、空气过滤系统、各个进出料口，确保灭菌无死角。将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。
3.1.3在工作开始前30～40min，按净化级别要求调整送风量，达到洁净级别要求。
3.1.4提前一天对发酵罐进行全面灭菌，并保持发酵罐正压。3.2进料及培养基灭菌(mièjūn)
将配制好的培养基通过管道打入发酵罐，加入消泡剂（猪油），然后对进料管道进行清洗、灭菌，关闭进料阀门，对培养基及所有的进出口、空气过滤系统进行灭菌，当温度达到90℃和100℃时，分别经上面空气进管和下面放料口向罐内通入蒸汽1分钟左右，罐内116℃保持40分钟，其他位置121℃保持40分钟。灭菌(mièjūn)结束后马上夹层通冷水进行降温并及时补充无菌空气保持罐内正压。当温度降至40℃时，关闭冷水管道停止降温，通无菌空气保持罐内正压，打开自动控温系统的阀门和开关，温度控制在37℃。
3.3接种
在火焰保护下，连接种子瓶和发酵罐接种口，打开发酵罐出气阀关小发酵罐进气阀使罐内压力接近于0，确认无误后打开接种阀门，利用正压空气将二级种子按1%-2%的接种量接种于普通肉汤中，然后(ránhòu)按2.5%加入40%灭菌葡萄糖溶液。3.4发酵培养
接种后先小气量通入无菌空气2h，然后逐渐加大通气量，每2h增加通气量，培养后期每小时测定一次pH，当pH上升到7.8时加入40%葡萄糖溶液2000ml调整(tiáozhěng)pH，培养18～20小时，当菌数将要达到最高峰时停止培养收获菌液，将菌液放入灭菌大玻璃瓶中。4、配