最新精编医学专题—细菌菌落总数的测定.ppt

食品微生物学检验菌落(jūnluò)总数的测定一、目的1、学习并掌握食品中菌落总数(zǒngshù)测定方法和原理。2、了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义。二、原理(yuánlǐ)1、菌落总数是指食品检样经过处理在一定条件下培养后所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落总数。以CFU/g（mL）来表示。一定条件包括培养基成分、培养温度和时间、pH、是否(shìfǒu)需要氧气等。按国家标准方法规定即在需氧情况下36±1℃培养48±2h能在平板计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及(yǐjí)非嗜中温的细菌由于现有条件不能满足其生理需求故难以繁殖生长。菌落总数并不表示实际(shíjì)中的所有细菌总数也不能区分其中细菌的种类只包括一群在计数平板琼脂中生长发育、嗜中温的需氧和兼性厌氧的细菌菌落总数所以有时被称为杂菌数需氧菌数等。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志也可以应用这一方法观察(guānchá)细菌在食品中繁殖的动态以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。食品中细菌菌落(jūnluò)总数越多则食品含有致病菌的可能性越大食品质量越差；菌落总数越小则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验才能对食品做出较全面的评价。2、细菌(xìjūn)总数指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微镜数。通常以1g或1mL样品中的细菌总数来表示。三、材料(cáiliào)四、流程(liúchéng)五、步骤(bùzhòu)2、用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL沿管壁徐徐(xúxú)注入含有9mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内振摇试管或反复吹打混合均匀制成1:100的稀释液。3、另取1mL灭菌吸管按上项操作顺序(shùnxù)制10倍递增稀释液如此每递增稀释一次即换用1支1mL吸管。4、根据标准要求或对污染情况的估计选择2～3个适宜稀释度分别在制作10倍递增稀释的同时以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌(mièjūn)平皿中每个稀释度做两个平皿。同时分别取1ml稀释液（不含样品）加入两个灭菌平皿内作空白对照。5、稀释液移入平皿后将冷却至46℃琼脂培养基注入平皿约15～20ml并转动(zhuàndòng)平皿混合均匀。6、待琼脂凝固后翻转平板置36±1℃温箱内培养48±2h水产品30±1℃温箱内培养72±3h。如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长(shēngzhǎng)的菌落时可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4毫升）凝固后培养。（二）菌落记录方法做平板菌落数记录时可用肉眼观察必要时用放大镜检查以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后求出同稀释度的各平板平均菌落数。到达规定培养时间应立即计数(jìshù)。如果不能立即计数(jìshù)应将平板放置于0～4℃但不要超过24h。1、平皿菌落数的选择选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个(liǎnɡɡè)平皿大于300的可记为多不可计。2、其中一个平板有较大片状菌落(jūnluò)生长时则不宜采用而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半而其余一半中菌落分布又很均匀则可以计算半个平板后乘以2以代表一个平板的菌落数。3、当平板(píngbǎn)上有链状菌落生长时如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限则应作为一个菌落计如存在有几条不同来源的链则每条链均应按一个菌落计算不要把链上生长的每一个菌落分开计数。（三）菌落总数的计算1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内计算两个平板菌落数的平均值再将平均值乘以相应稀释倍数(bèishù)作为每g（mL）中菌落总数结果。试样例次2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时按如下(rúxià)公式计算：N=∑C/（n1+0.1n2）d…………（1)式中：N―样品中菌落数；∑C―平板（含适宜范围菌落数的