医学专题—细菌菌落总数的测定.ppt

食品微生物学检验菌落(jūnluò)总数的测定一、目的
1、学习并掌握食品中菌落总数(zǒngshù)测定方法和原理。2、了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义。二、原理(yuánlǐ)1、菌落总数
是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落总数。以CFU/g（mL）来表示。
一定条件包括培养基成分、培养温度和时间、pH、是否(shìfǒu)需要氧气等。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，36±1℃培养48±2h，能在平板计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及(yǐjí)非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。菌落总数并不表示实际(shíjì)中的所有细菌总数，也不能区分其中细菌的种类，只包括一群在计数平板琼脂中生长发育、嗜中温的需氧和兼性厌氧的细菌菌落总数，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察(guānchá)细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。食品中细菌菌落(jūnluò)总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全面的评价。2、细菌(xìjūn)总数
指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微镜数。通常以1g或1mL样品中的细菌总数来表示。三、材料(cáiliào)四、流程(liúchéng)五、步骤(bùzhòu)2、用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，沿管壁徐徐(xúxú)注入含有9mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内，振摇试管或反复吹打混合均匀，制成1:100的稀释液。
3、另取1mL灭菌吸管，按上项操作顺序(shùnxù)，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1mL吸管。4、根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌(mièjūn)平皿中，每个稀释度做两个平皿。
同时分别取1ml稀释液（不含样品）加入两个灭菌平皿内作空白对照。
5、稀释液移入平皿后，将冷却至46℃琼脂培养基注入平皿约15～20ml，并转动(zhuàndòng)平皿，混合均匀。6、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。
如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长(shēngzhǎng)的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4毫升），凝固后培养。
第十八页，共五十一页。（二）菌落记录方法做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。
到达规定培养时间，应立即计数(jìshù)。如果不能立即计数(jìshù)，应将平板放置于0～4℃，但不要超过24h。
1、平皿菌落数的选择选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个(liǎnɡɡè)平皿，大于300的可记为多不可计。
2、其中一个平板有较大片状菌落(jūnluò)生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可以计算半个平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。3、当平板(píngbǎn)上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。（三）菌落总数的计算
1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数(bèishù)，作为每g（mL）中菌落总数结果。试样例次2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下(rúxià)公式计算：N=∑C/（n1+0.1n2）d…………（1)式中：N―样品中菌落数；∑C―平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；nl―第一个适宜稀释度平板数；n2―第二个适宜稀释度平板数；d―稀释因子（第一稀释度）。例如：稀释度1:100（第一(dìyī)稀释度）1:1000（第二稀释度）菌落数232，24433，35232+244+33+35
(2+0.1×2)×10-2

=544/0.022=24727
四舍五入表示为:2.5×104试样例次3、若所有稀释度的平板菌落(jūnluò)数均>300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数计算。试样