最新精编医学专题—细菌的生化试验2015.ppt

第三节细菌的生化(shēnɡhuà)鉴定技术第三页共四十三页。细菌(xìjūn)的基本鉴定技术第一(dìyī)碳水化合物代谢试验糖发酵试验(shìyàn)结果判断1．原理：细菌在分解葡萄糖的代谢过程中根据对氧分子参加的需要分成三种类型：需要分子氧参加的为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型发酵型细菌无论(wúlùn)在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖。在有氧和厌氧环境中都不能分解葡萄糖的细菌为产碱型或不活动型细菌。2．结果：发酵特征试管颜色不变而氧化特征试管颜色变黄表明试验(shìyàn)细菌的葡萄糖分解代谢为氧化型；两管颜色均变黄色为发酵型；两支培养管颜色均不变为产碱型或不活动型。糖发酵(fājiào)试验原理：细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖产生丙酮酸丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸等使培养pH下降至4.5以下时加入甲基红指示剂呈现红色(hóngsè)。如细菌分解葡萄糖产酸量少或产生的酸进一步转化为其它物质(如醇、酮、醛、气体和水)培养基pH在5.4以上甲基红(MR)试验呈橘黄色。2．结果(jiēguǒ)：呈现红色者为阳性；橘黄色为阴性；橘红色为弱阳性。某些细菌分解(fēnjiě)葡萄糖后生成丙酮酸丙酮酸的分解(fēnjiě)产物则因细菌种类不同而有差别如产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧产生中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化成二乙酰在α-奈酚的催化作用下与培养基中氨基酸如精氨酸中的胍基化合物络合形成红色的化合物即V-P试验阳性。VP阴性(yīnxìng)VP阳性五．β—半乳糖苷酶试验(shìyàn)(ONPG试验)：第十五页共四十三页。六．七叶苷水解(shuǐjiě)试验：第二蛋白质和氨基酸代谢(dàixiè)试验二．尿素(niàosù)酶试验：四．苯丙氨酸脱氨酶试验(shìyàn)：第三碳源利用(lìyòng)试验第四呼吸(hūxī)酶类试验硝酸盐还原试验是测定还原过程(guòchéng)中生成的亚硝酸。氧化酶试验(shìyàn)氧化酶试验(shìyàn)氧化酶试验(shìyàn)氧化酶试验(shìyàn)氧化酶试验(shìyàn)过氧化氢(ɡuòyǎnɡhuàqīnɡ)酶试验过氧化氢(ɡuòyǎnɡhuàqīnɡ)酶试验过氧化氢(ɡuòyǎnɡhuàqīnɡ)酶试验过氧化氢(ɡuòyǎnɡhuàqīnɡ)酶试验第五(dìwǔ)复合生化试验连续培养数小时后在细菌和氧的作用下培养基斜面部分所含氨基酸发生降解释放胺类产即中和斜面部分酸经18～24小时后整个斜面转变为碱性(jiǎnxìnɡ)又复原以红色。如某菌既分解葡萄糖又分解乳糖那在KIA上产生大量酸（因乳糖含量多）超过斜面上形成(xíngchéng)的碱成长整管培养基呈黄色。培养基中的硫代硫酸钠可供给细菌产生H2S所需要的硫铁盐-硫酸亚铁和枸橼酸铵铁分别与H2S起反应产生不溶性的黑色FeS沉淀。由于细菌产生H2S需要在酸性环境(huánjìng)中所以KIA只限于琼脂深层变黑。结果：碱性（K）酸性（A）K/K：不发酵(fājiào)碳水化合物为不发酵(fājiào)菌特征。K/A：葡萄糖发酵乳糖不发酵如志贺菌。K/A（黑色）：葡萄糖发酵乳糖不发酵并产生硫化氢如沙门菌。A/A：葡萄糖和乳糖发酵如大肠埃希菌和克雷伯菌属。二．动力靛基质(jīzhì)尿素试验（MIU）原理：当细菌在内生长通过半固体培养基可观察其动力另如果细菌能产生色氨酸酶它可水解色氨酸形成靛基质当加入对-二甲氨基(ānjī)苯甲醛（靛基质试剂）时可形成玫瑰色吲哚玫瑰色吲哚为红色。如该菌又能产生尿素酶利用培养基中的尿素产碱加酚红指示剂后显桃红色。因此MIU可以观察细菌动力、靛基质的产生和细菌分解尿素的活性。A管：MIU＋－－明胶水解实验某些细菌能分泌明胶酶分解明胶产生小分子物质。如果细菌具有(jùyǒu)分解明胶的能力则平板培养基中的明胶被分解成小分子的物质在平板上加上蛋白凝固剂后明胶被分解部分的培养基呈现透明的状态可以使菌落周围出现透明圈。淀粉(diànfěn)水解实验硫化氢产生(chǎnshēng)实验内容(nèiróng)总结