最新精编医学专题—分解尿素的细菌的分离和计数—Alan.ppt

课题2土壤中分解尿素的细菌(xìjūn)的分离与计数一、课题(kètí)背景课题(kètí)目的1、实例(shílì)：不加有机(yǒujī)碳源15.0g②在此培养基中哪些(nǎxiē)作为碳源、氮源？如当石油是唯一碳源时可抑制不能利用石油的微生物的生长使能够利用石油的微生物生存从而分离出能消除(xiāochú)石油污染的微生物。1.使用选择培养基的目的是（）A.培养细菌B.培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以(jiāyǐ)区别2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素5、怎样证明(zhèngmíng)此培养基具有选择性呢？微生物的培养(péiyǎng)与观察鉴定：在以尿素为唯一(wéiyī)氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后如果PH升高指示剂将变红说明该细菌能够分解尿素。大肠杆菌(dàchánɡɡǎnjūn)呈黑色中心有或无金属光泽1、显微镜直接(zhíjiē)计数：2.稀释涂布平板(píngbǎn)法⑴原理：在稀释度足够高时微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的即一个菌落代表原先的一个单细胞。二.实验(shíyàn)的具体操作㈠.土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右再取样将样品装入事先准备好的信封中。◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。㈡.制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。◆应在火焰旁称取土壤(tǔrǎng)10g。◆在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在火焰旁进行㈣.取样(qǔyàng)涂布㈣.取样(qǔyàng)涂布㈤.微生物的培养(péiyǎng)与观察◆如果得到了2个或2个以上菌落(jūnluò)数目在30——300的平板则说明稀释操作比较成功并能够进行菌落的计数如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大表明试验不精确需要重新实验。注意事项①为了保证结果准确一般选择菌落数在30——300的平板(píngbǎn)上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中经涂布培养计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。设置对照的主要目的是排除(páichú)实验组中非测试因素对实验结果的影响提高实验结果的可信度。实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约(dàyuē)150个菌落但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。小结：通过这个事例可以看出实验(shíyàn)结果要有说服力对照的设置是必不可少的。四、操作(cāozuò)提示4.下列说法(shuōfǎ)不正确的是（）A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5以M3作为该样品菌落数的估计值C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响提高实验结果的可信度D.同其他生物环境相比土壤中的微生物数量最大种类最多。5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌常在培养基中加入（）A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质C.青霉素类药物D.高浓度食盐练一练用稀释涂布平板法来统计样品(yàngpǐn)中活菌的数目其结果与实际值相比（）A.比实际值高B.比实际值低C.和实际值一致D.比实际值可能高也可能低本课题知识(zhīshi)小结:内容(nèiróng)总结