对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析.doc

仪器分析实验二：
对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析
——归一化法定量
目的要求：
熟悉高效液相色谱分析操作。
学习高效液相色谱保留值定性方法和归一化法定量。
基本原理：
保留值定性见实验一。
归一化法定量的计算公式：
c%=fiAi/∑fiAi*100
对羟基苯甲酸酯类混合物属于同系物，具有相同的生色团和助色团，因此它们在紫外光度检测器上具有相同的校正因子，所以上式可简化为：
c%=Ai/∑Ai*100
仪器
Angile1100高效液相色谱仪
试剂
对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、异戊醇等均为分析纯
甲醇为色谱纯
水是娃哈哈纯净水。
标准溶液的配制：
（1）标准使用液浓度均为10μg/ml的对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的甲醇溶液。
（2）标准混合使用液：将上述四种标准储备液混合，混匀备用。
实验条件
色谱柱长150mm、内径4.6mm，填装C-8烷基键合相，颗粒度为5μm的固定相。
流动相甲醇：水（70：30），流量：1.2ml/min
检测器紫外光度检测器254nm
进样量3μl
实验步骤
过滤流动相
过滤样品
仪器操作，待基线平直即可进样
分别吸取3μl四种标准使用液和标准混合液进样，记录，并各重复两次。
数据及处理
1、测量四种对羟基苯甲酸酯化合物色谱图的保留时间。
t1t2t3平均值对羟基苯甲酸甲酯对羟基苯甲酸乙酯对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯
2、依次测量标准混合液色谱图上各色谱峰的保留时间，确定各色谱峰代表的是何种化合物。
t1t2t3平均值相应化合物峰1峰2峰3峰4
3测量标准混合液色谱图上各色谱峰的峰高，半峰宽，计算各组分的峰面积及其含量。
峰高半峰宽峰面积C%对羟基苯甲酸甲酯对羟基苯甲酸乙酯对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯
思考题：
1、高效液相色谱流动相为何要脱气？
2、本实验为何可以不用相对质量校正因子？