孕酮对缺血脑的保护及其机理研究.doc

河南省自然科学基金项目：孕酮对缺血脑的保护及其机理研究

孕酮对缺血脑的保护及其机理研究

研究内容

研究摘要

一、孕酮对大鼠局灶性脑缺血-再灌注脑水肿的影响
采用大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型，大鼠随机分为①缺血再灌(I/R)组:只进行缺血-再灌注手术,不作药物处理;②二甲基亚砜（DMSO）组:缺血前30min、缺血后6h分别i.p溶剂DMSO(0.5mL/kg体重);③预防组:缺血前30mini.pPROG4mg/kg体重;④防治组:缺血前30min和缺血后6h分别i.pPROG4mg/kg体重;⑤治疗组:缺血后2hi.pPROG4mg/kg体重;⑥地塞米松（DEXA）组(即阳性对照组):缺血前30min和缺血后6h分别i.pDEXA4mg/kg体重。干湿重法测定脑组织含水量，火焰分光光度计和原子吸收分光光度计测定脑组织Na+、K+、Ca2+含量，定量伊文思蓝法测定血脑屏障通透性。结果如下：
1．孕酮对局灶性缺血-再灌注大鼠脑组织水、Na+、K+含量的影响
I/R组水、Na+含量缺血侧显著高于对侧（P<0.05）。预防组、防治组、治疗组（PROG４mg/kg组）和DEXA组缺血侧脑皮质和纹状体水与Na+含量均显著低于I/R组（P<0.05，P<0.01）。而DMSO组和2mg/kg治疗组与I/R组比较无显著差异（P>0.05）。缺血后缺血侧脑组织K+含量降低，预防组、防治组和DEXA组脑皮质和基底神经节K+含量均显著高于I/R组和DMSO组（P<0.05，P<0.01）。
2．孕酮对局灶性I/R大鼠脑组织Ca2+含量的影响
脑缺血-再灌注损伤后，缺血侧脑皮质和纹状体Ca2+含量显著升高，I/R组缺血侧Ca2+含量较对侧升高有显著差异（P<0.05）。DMSO组缺血侧Ca2+含量与I/R组比较无显著差异。预防组、防治组和DEXA组与I/R组、DMSO组比较缺血侧Ca2+含量显著降低（P<0.05）。其它PROG用药组虽有降低缺血侧脑组织Ca2+含量的趋势，但与I/R组比较无显著差异（P>0.05）。
3．孕酮对局灶性I/R大鼠血脑屏障通透性的影响
大脑中动脉阻塞２４h后，肉眼观显示I/R组和DMSO组大鼠缺血侧大脑半球以大脑中动脉为圆心蓝染区。定量测定结果显示PROG组缺血侧伊文思蓝含量显著低于I/R组和DMSO组，统计学上有显著的差异（P<0.05），而非缺血侧无显著变化(P>0.05)。
以上结果表明PROG对局灶性脑缺血-再灌注后脑水肿有明显的预防和治疗作用。这种作用可能是通过降低脑皮层和纹状体Na+和Ca2+的含量，改善血脑屏障通透性实现的。
二、孕酮抗大鼠局灶脑缺血-再灌注后神经元的凋亡
采用大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型，将大鼠随机分为6组：假手术（Sham）组、I/R组、DMSO组、PROG预防组、PROG治疗组、PROG防治组，对各组动物I/R后神经功能缺陷进行计分，并应用免疫组织化学和细胞死亡原位末端标记法研究脑组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53的表达情况。
结果如下：（1）缺血2h再灌注24h后神经功能缺陷计分:Sham组为0分，I/R组为1.38±0.92，DMSO组为1.0±0.53，PROG预防组为0.35±0.51，PROG治疗组为0.62±0.52，PROG防治组为0.25±0.46。（2）高倍视野下p53蛋白阳性细胞数:I/R组为26.25±3.54,DMSO组为22.88±3.52,PROG预防组为15.00±2.07，PROG治疗组为16.75±2.60，PROG防治组为10.38±1.69。（3）高倍视野下Bcl-2蛋白阳性细胞数:I/R组为9.50±1.69，DMSO组为10.25±2.61，PROG预防组为17.13±1.13，PROG治疗组16.63±1.30，PROG防治组为23.50±1.93。(4)高倍视野下Bax蛋白阳性细胞数:I/R组为28.13±2.75,DMSO组为27.75±3.06,PROG预防组为14.25±1.83，PROG治疗组13.00±1.85,PROG防治组为11.38±1.41。(5)高倍视野下凋亡细胞数：Sham组为1.88±0.25,I/R组为41.38±3.85,DMSO组为38.13±5.69,PROG预防组为22.88±2.70，PROG治疗组为25.63±2.93,PROG防治组为20.88±2.30。以上5项指标各药物处理组(PROG预防组、PROG治疗组及PROG防治组)与对照组(I/R组，DMSO组)之间差异具有统计学意义(P<0.05)。
以上结果表明：PROG可减轻大鼠脑缺血-再灌注后的神经元凋亡，减少局灶性缺血-再灌注脑损伤动物模型神经功能缺失。抑制脑神经细胞中p53、Bax蛋白表达；上调B