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Bradford法测定蛋白质的浓度

原理
Bradford测定蛋白质浓度的方法和考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度一样，是利用蛋白质-染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。
该法是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成，实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。
利用此方法检测速度极快，10～20个样品只需不足10分钟即可完成。
灵敏度高，检测浓度下限达到25ug/ml,最小检测蛋白量达到0.5ug,待测样品体积为1～20ul。
且在50～1000ug/ml浓度范围内有较好的线性关系。
Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中-巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.01%，TritonX-100低于0.05%，Tween20,60,80低于0.015%。
试剂和仪器
试剂
试剂盒自备：G250染色液、BSA标准蛋白。
BSA标准蛋白浓度已稀释至500μg/ml，-20℃保存。
测试样品
待测样品蛋白浓度稀释在50-500μg/ml范围内为宜。
三、仪器
96孔酶标、酶标仪。
操作方法
标准品编号12345678500ug/mlBSA/μl01.53612182430蒸馏水/μl3028.52724181260分别于小离心管中混匀后，取20μl加入到对应酶标孔中待测样品编号9101112131415……待测样品稀释后，各取20μl加入到相应酶标孔中G250/μl200μl/孔反应3-5min1.用酶标仪测定A595nm处的吸光值。
2.根据标准曲线计算待测样品的蛋白浓度。