革兰氏染色和热灭活.doc

热灭活：温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等.其中最常用的手法是56℃热处理30分钟。热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质，热灭活并不会改善细胞的生长，却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下，其促进的比率也是微不足道的。另外，血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物的污染。以56摄氏度，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/5682708.html"\t"_blank"肥大细胞和HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/5376266.html"\t"_blank"血小板组胺的释放，增强吞噬作用，HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/1030278.html"\t"_blank"淋巴细胞、HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/4964689.html"\t"_blank"巨噬细胞的趋化和激活。

革兰氏染色是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用龙胆紫染色，加碘液媒染后用酒精脱色，再用蕃红复染。革兰氏染色属复染法，即将HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/4221697.html"\t"_blank"标本固定后，先用HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/4231068.html"\t"_blank"龙胆紫染色，加碘液媒染后用HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/5387564.html"\t"_blank"酒精脱色，再用蕃红复染。染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/971220.html"\t"_blank"革兰氏阳性菌（G+）。被酒精脱色复染成红色者为HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/5635555.html"\t"_blank"革兰氏阴性菌（G-）。革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/2554448.html"\t"_blank"等电点等因素有关。致病菌如HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/5672439.html"\t"_blank"金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、碳疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。原理：该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/4713899.html"\t"_blank"细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/3036121.html"\t"_blank"乙醇或HYPERLINK"http://baike.so.com/doc/252057.html"\t"_blank"丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。
实验流程
1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、涂片：
液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
5、染色：将固定过的涂片放