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BCA法测定蛋白(dànbái)浓度【原理】:碱性条件下蛋白将Cu2+还原为Cu+Cu+与BCA试剂形成紫颜色(yánsè)的络合物测定其在562nm处的吸收值并与标准曲线对比即可计算待测蛋白的浓度。【主要特点】1.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。2.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。3.快速:45分钟内完成测定。4.准确灵敏线性范围广。5.经济实用:在微孔板中进行测定可大大(dàdà)节约样品和试剂用量。【实验(shíyàn)器材与试剂】【操作步骤】1.配制BCA工作液:根据标准品和样品数量按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制适量BCA工作液充分(chōngfèn)混匀。2.稀释标准品:用生理盐水稀释蛋白标准品BSA。蛋白(dànbái)液稀释第八页共十二页。5、按上表将稀释好的A-GBSA标准品和待测蛋白样品(原液1:101:100稀释液)各150μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。6、向每个试管中各加入3mlBCA工作液充分混匀37℃水浴中孵育(fūyù)30分钟将各管冷却至室温须在3-5分钟内完成检测。7、用分光光度计在562nm处测定每个样品及BSA标准品的吸光值同时做好记录。8、绘制标准曲线计算样品中的蛋白浓度。内容(nèiróng)总结