最新精编医学专题—BCA法测定蛋白质浓度的方法.docx

1.根据样品数量按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B〔50:1〕配制适量BCA工作液充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。2.完全溶解蛋白标准品取10微升稀释至100微升使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。3.将标准品按01248121620微升加到96孔板的标准品孔中加标准品稀释液补足到20微升。4.加适当体积样品到96孔板的样品空中加标准品稀释液到20微升。5.各孔参加200微升BCA工作液37℃放置30分钟。注：也可以在室温放置2小时或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反响会因温度升高而加快。如果浓度较低适合在较高温度孵育或延长孵育时间。测定A562540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。混匀的问题可以在参数中选择快速震荡30s就可以了做的好的话可以到达4个九事先配好各个浓度的bsa标准品step1A液和B液按50：1混合〔比方你要测2个样品可以是6个标准曲线点00.050.10.20.51mg/ml加上2个样品也就是8个孔做平行就是16孔那么取A液取16*0.2=3.2mlB液取64ul混合就ok了〕step2每孔加200ul混合液然后标准曲线孔参加25ul标准品样品稀释到适宜的比例也参加25ul〔如果图省事的话比方也可以加1ul样品再加24ul水补齐加样的时候可能不会太准〕step337度孵育30minstep4测od565附近也行内容总结〔1〕1.根据样品数量按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B〔50:1〕配制适量BCA工作液充分混匀〔2〕注：也可以在室温放置2小时或60℃放置30分钟〔3〕如果浓度较低适合在较高温度孵育或延长孵育时间〔4〕根据标准曲线计算出蛋白浓度