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江西林业科技2006年第5期

AFLP标记及其在植物中的应用

江梅，李小平，温强，叶金山，江香梅

(江西省林业科学院省植物生物技术重点实验室，江西南吕330032)

摘要：时AFLP基本原理、技术流程及特点做了简要介绍：从遗传多样性和亲缘关系分析、遗传连锁图谱构建、种
质资源鉴定、基因定位与克隆、基因表达与调控、分子标记辅助选择育种等方面概述了AFLP标记在植物中的应用，并对
其应用前景进行了展望。

关键词：AFLP；分子标记：植物；应用

分类号：Q789：$7文献标识码：A文章编号：1006-2505(2006)05-004]一04

AFLP(AmplifiedFragmentLen舢Polymorphism，扩增1．3AFLP技术的特点
片断长度多态性1是1992年由荷兰科学家Zabeau和Vos发AFLP结合了RFLP和RAPD的优点，主要表现在：①
展起来的一种检测DNA多态性检测方法It]，1993年获得欧AFLP标记理论上可以无限多，可覆盖整个基因组，不需要
洲专利局专利。AFLP技术是在RFLP和RAPD基础上发展预知I)NA序列信息，呈典型的孟德尔方式遗传；②AFLP
起来的，具有RAPD和RFLP技术的双重优点，对基因组的技术能高效地检测出DNA的多态性，几乎每对AFLP引
多态性检测不需要预知该基因组的序列特征．易于标准物都可以扩增出具有多态性的片段，一般一次检测可获得
化，所检出的多态位点同RAPD一样可覆盖整个基因组：同5；0—100个AFLP扩增带：DNA用量少，且对模板浓度变
时具有与RFLP标记同样的稳定性和可靠性]。因此，AFLP化不敏感；④可靠性好，分辨率和重复性高；⑤引物通用性
被认为是迄今为止最有效的分子标记_4]，被广泛应用于农作强_6．7]。
物、蔬菜、林木、果树等植物的遗传多样性和亲缘关系分析、2AFLP在植物分子生物学研究中的应用
遗传连锁图谱构建、种质资源鉴定、基因定位与克隆、基因1遗传多样性和亲缘关系研究
表达与调控、标记辅助选择育种等方面研究。开展遗传多样性研究有利于正确制定植物资源收集
1AFLP技术原理、流程及特点保存策略，确定植物遗传多样性中心和亲缘关系等。AFLP
1．1AFLP技术的基本原理已广泛应用于植物遗传多样性检测和分析f8_。王燕等采
AFLP技术是先将基因组DNA用两种限制性内切酶用AFLP标记分析了元宝山冷杉种群的遗传多样性，4对
酶切成大小不等的酶切片断，并与含有粘性末端的人工接引物共扩增出261条谱带，多态位点百分率为50．96％，认
头相连，形成不同酶切位点的限制性酶切片段，然后用与为元宝山冷杉种群的遗传多样性水平低，种群内个体间的
接头和位点相匹配的引物进行预扩增，预扩增产物作为进丰f{似性系数很大，无明显亚种群间的遗传分化，从而为冷

一步PCR扩增的模板，再选用特异引物进行选择性扩增，杉保护策略和保存措施的制订提供了理论依据。张磊等【l0]
扩增后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳将特异的限制性片用l2对引物对28个巾国红花不同栽培种群进行AFLP分
段分离C5]。由于不同来源的DNA的酶切片段存在差异，因析，共扩增出845条带，多态位点达73％，各种群间的遗传
而便产生了扩增产物的多态性。棚似系数在0．48—0．96，聚类分析可将其分为3大主要类
1．2技术流程群和～个中间类群，较好地确定了红花各栽培品种间的亲
AFLP技术的具体过程为[5I6]：①DNA提取和质量检测；缘关系。孔秋生等It-]利用f筛选出的8对引物对56份来源
②双酶切和酶切片段连接：③酶切连接片段的预扩增；④于：不同国家和地区的栽培萝卜种质的亲缘关系进行了
选择性扩增；⑤PcR产物变性后在聚丙烯酰胺变性凝胶上AFLP分析，共扩增出327条带，其中多态性带128条，多
电泳；⑥将电泳后的凝胶进行银染显影并拍照保存。态位点百分率39．1％，认为栽培萝卜种质之间存在着较丰

收稿日期：2006-08—12
作者简介：江梅。女，硕士研究生。从事植物分子生物学研究。
基金项目：国家自然科学基金“闽楠、红楠保护生物学研究”(项日批准号：30560126)资助。
。通讯作者。

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富的遗传多样性，聚类分析表明亚洲与欧洲栽培萝卜种质提高保存效率。这是因为AFLP标记在种质细微差别的鉴
之间表现出较远的亲缘关系。王献等【l2利用7对M+3／P+3定方面具有独到的功效。宋顺华等采用AFLP技术研
引物对3O个紫薇品种和2个近缘种之间的亲缘关系进行究了90份来自7个不同栽培地区的大白菜品种材料，其
了分析，聚类结果表明：矮生品种间的亲缘关系较近，它们中E—ACA／M—CTG是大白菜品种十分高效的引物组合。能
巾‘粉润’和‘矮生垂枝粉’关系最近，具有优异性状的