茶 游离氨基酸的测定.doc

茶游离氨基酸总量测定

文件类别：作业指导书
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名称茶游离氨基酸总量测定文件编号:1原理
氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。
2仪器和用具
分析天平：感量0.0001g。分光光度仪。
3试剂和溶液
3.1pH8.0磷酸盐缓冲液：
按《茶茶多酚测定》中3.2的规定，配制1/15M磷酸氢二钠（3.2.1）和1/15M磷酸二氢钾（3.2.2）溶液。然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95ml和1/15M磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。
3.22%茚三酮溶液：
称取水合茚三酮（纯度不低于95%）2g，加50ml水和80mg氯化亚锡（GB638-78，分析纯），搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。
3.3茶氨酸或谷氨酸标准液：
称取100mg茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水中，作为母液。准确吸取5ml母液，加水定容至50ml作为工作液（1ml含茶氨酸或谷氨酸0.1mg）。
4操作方法
4.1取样方法
按“茶叶原料验收规范”（文件编号…………）要求进行取样。
4.2试液制备
按《茶茶多酚测定》中4.2.1试液制备之规定，制备试液。
4.3测定
准确吸取试液（4.2）0.5ml，注入25ml容量瓶中，加0.5ml水，0.5mlpH8.0缓冲液（3.1）和0.5ml2%茚三酮溶液（3.2），在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25ml。放置10min后，用10mm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。生效日期页次1/2页序A表号:R-0110-002-1A文件标准用纸

名称茶游离氨基酸总量测定文件编号:4.4氨基酸定量标准曲线的制作
分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml氨基酸工作液（3.3）于一组25ml容量瓶中，各加水至4ml、茚三酮溶液（3.2）0.5ml和缓冲液（3.1）2ml，在沸水浴中加热15min，冷却后加水定容至25ml，按4.3的操作测定吸光度（A）。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线。
参考标准曲线：C=0.1686*A+0.0381
5结果计算
5.1计算方法和公式
茶叶中游离氨基酸含量，以干态质量百分率表示，按下式计算：

式中： B——试样液总质量，g；
L——测定用试样量，ml；
M——试样量，g；
C——根据4.3测定的吸光度从标准曲线上查得的茶氨酸的mg数；
1.002——试样液比重（经验值）；
m——试样干物质含量百分率，%。
5.2重复性
同一样品进行两次测定，取两次测定的算术平均值作为结果。测定值之差，不得超过平均值的5%。

备注：本方法参考GB8314《茶游离氨基酸总量的测定》。生效日期页次2/2页序A表号:R-0110-002-1A文件标准用纸