微藻油脂的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102033059A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102033059A(43)申请公布日2011.04.27(21)申请号201010563972.3(22)申请日2010.11.29(71)申请人哈尔滨工业大学地址150001黑龙江省哈尔滨市南岗区西大直街92号(72)发明人冯玉杰李超刘佳张大伟(74)专利代理机构哈尔滨市松花江专利商标事务所23109代理人韩末洙(51)Int.Cl.G01N21/64(2006.01)G01N1/30(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称微藻油脂的检测方法(57)摘要微藻油脂的检测方法，它属于油脂检测领域。本发明解决了称重法所需样品大、耗费时间长的技术问题。本发明方法：一、将微藻培养液稀释，得到稀释液；二、测定稀释液染色后的荧光强度；三、将稀释液离心，取上清液测定染色后的荧光强度；四、取稀释液，测定未染色时的荧光强度；五、计算最大荧光强度差值，根据荧光强度-脂含量标准曲线，计算微藻油脂含量。本发明方法适用对小球藻、栅藻、螺旋藻、硅藻、甲藻、金藻、裸藻、轮藻等单细胞藻类进行检测，也可对细胞破碎预处理后的大型藻类进行检测。CN102359ACCNN110203305902033062A权利要求书1/2页1.微藻油脂的检测方法，其特征在于微藻油脂的检测方法是按下述步骤进行的：一、将微藻培养液稀释至0.05g/L～0.5g/L，得到稀释液；二、取10mL步骤一的稀释液，然后加入100μL尼罗红溶液，避光下染色，选择400～600nm作为激发波长，测定在发射波长450～700nm之间的荧光强度，荧光强度记为X1；三、将步骤一稀释液在温度为4℃、转速为10000r/min的条件下离心10min，取上清液作为空白，取10mL上清液，然后加入100μL尼罗红溶液，避光下染色，选择400～600nm作为激发波长，测定在发射波长450～700nm之间的荧光强度，荧光强度记为X2；四、取步骤一的稀释液，选择400～600nm作为激发波长，测定在发射波长450～700nm之间的荧光强度，荧光强度记为X3；五、按X1-(X2+X3)公式计算出最大荧光强度差值，然后根据荧光强度-脂含量标准曲线计算微藻油脂含量；即完成了微藻油脂的检测。2.根据权利要求1所述的微藻油脂的检测方法，其特征在于步骤一中稀释微藻培养液用的溶剂为蒸馏水、自来水、去离子水、超净水或矿泉水。3.根据权利要求2所述的微藻油脂的检测方法，其特征在于步骤二所述尼罗红溶液的溶剂为丙酮、乙醇、丙醇、二氧六环、四氢呋喃或甲乙酮。4.根据权利要求3所述的微藻油脂的检测方法，其特征在于步骤二所述尼罗红溶液的浓度为0.01g/L～0.5g/L。5.根据权利要求3所述的微藻油脂的检测方法，其特征在于步骤二所述尼罗红溶液的浓度为0.05g/L。6.根据权利要求1-5中任一项权利要求所述的微藻油脂的检测方法，其特征在于步骤五所述荧光强度-脂含量标准曲线测定方法如下：步骤a、从同一藻种的培养液中取处于不同生长阶段的培养液；步骤b、将所取的培养液在温度为4℃、转速为10000r/min的条件下离心10min，并用蒸馏水清洗3～5次后，取离心所得的微藻生物质，并在-70度条件下冻干获得干藻粉，取0.1g干藻粉，加入0.8mL蒸馏水，再加入1mL氯仿和2mL甲醇，振荡2min后，超声破碎1min，再加入1ml氯仿振荡1min，再加入1ml蒸馏水，再振荡1min，然后在4000r/min条件下离心5min，离心后，取氯仿相转移到另一试管，再向原管中加入2mL氯仿提取，重复三次，将得到的氯仿相氮吹干到质量恒定，称重计算得到微藻脂含量；步骤c、将所取的培养液稀释至0.05g/L～0.5g/L，得到稀释液，取10mL稀释液，然后加入100μL尼罗红溶液，避光下染色，选择400～600nm作为激发波长，测定在发射波长450～700nm之间的荧光强度，荧光强度记为X1，将步骤一稀释液在温度为4℃、转速为10000r/min的条件下离心10min，取上清液作为空白，取10mL上清液，然后加入100μL尼罗红溶液，避光下染色，选择400～600nm作为激发波长，测定在发射波长450～700nm之间的荧光强度，荧光强度记为X2，取稀释液，选择400～600nm作为激发波长，测定在发射波长450～700nm之间的荧光强度，荧光强度记为X3，按X1-(X2+X3)公式计算出最大荧光强度差值；步骤d、以步骤b所测得的微藻脂含量为坐标，以步骤c尼罗红染色的最大荧光强度差值为横坐标，绘制荧光强度-脂含量标准曲线。7.微藻油脂的检测方法，其特征在于微藻油脂的检测方法是按下述步骤进行的：微藻油脂的检测方法是按下述步骤进行的：一、