轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102124952A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102124952A(43)申请公布日2011.07.20(21)申请号201110024195.X(22)申请日2011.01.21(71)申请人江苏九久环境科技有限公司地址214028江苏省无锡市新区净慧东道77号-8-3-2(72)发明人王远(74)专利代理机构无锡市大为专利商标事务所32104代理人曹祖良(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书4页(54)发明名称轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法(57)摘要本发明涉及一种轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)采集轮叶黑藻茎段；(2)脱毒：将轮叶黑藻茎段进行消毒；(3)诱导培养：将轮叶黑藻茎段接种入诱导培养基上进行诱导培养，诱导培养出轮叶黑藻不定芽；(4)增殖培养：将轮叶黑藻不定芽接种在增殖培养基上进行增殖培养，进一步培养出大量的不定芽；(5)生根培养：将经增殖培养后得到的不定芽接种在生根培养基上进行生根培养；(6)将经生根培养后的带有根须的轮叶黑藻的培养瓶打开，放置于室内自然条件下进行炼苗，取出培养瓶内的组培苗，洗净，转至池塘中养殖。本发明为生态修复净化水体、渔业养殖、有机肥堆制等提供需要，做到全年、可持续、大规模供应轮叶黑藻组培苗。CN102495ACCNN110212495202124956A权利要求书1/2页1.一种轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法，其特征是，包括以下步骤：(1)于春季从野外湖泊中采集轮叶黑藻茎段，在自来水中冲洗2～4h后，除去杂质，放入无菌水中浸泡20～30min，再经无菌水冲洗3～5次，备用；(2)脱毒：将经步骤(1)处理过的轮叶黑藻茎段用浓度70％～75％的酒精消毒4～8s，再用无菌水冲洗4～6次后，放入浓度为0.1％～0.15％的升汞中灭菌3～5min后用无菌水冲洗4～6次，置于无菌纸上晾干，切割成1～2cm；(3)诱导培养：将切割后的轮叶黑藻茎段接种入诱导培养基上进行诱导培养25～30天，诱导培养出轮叶黑藻不定芽；培养室温度为25±2℃，光照强度为1200～1600Lux，光照周期为10～12h/d；(4)增殖培养：将轮叶黑藻不定芽切成成1～2cm后，接种在增殖培养基上进行增殖培养25～35d，进一步培养出大量的不定芽；培养室温度为25±2℃，光照强度为1200～1600Lux，光照周期为10～12h/d；(5)生根培养：将经增殖培养后得到的不定芽切割成1～2cm，并带有2～3个小节段，接种在生根培养基上进行生根培养30～35d；培养室温度为25±2℃，光照强度为1200～1600Lux，光照周期为10～12h/d；(6)将经生根培养后的带有根须的轮叶黑藻的培养瓶打开，放置于室内自然条件下2～3d进行炼苗，炼苗温度在10～30℃，室内光照强度为1000～1200Lux，取出培养瓶内的组培苗，洗净，转至自然条件下的池塘中养殖。2.如权利要求1所述的轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法，其特征是：所述诱导培养基为1/2MS培养基中加入0.1～0.3mg/L的6-BA或0.1～0.3mg/L的NAA；所述增殖培养基为MS培养基加入0.5～1.0mg/L的6-BA与0.1～0.3mg/L的NAA；所述生根培养基为MS培养基加入0.2～0.4mg/L的6-BA、0.1～0.3mg/L的NAA和0.2～0.4mg/L的IBA；所述MS培养基的成分由大量元素、微量元素、有机成分、铁盐、蔗糖和琼脂组成。3.如权利要求2所述的轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法，其特征是：所述MS培养基的成分包括：所述大量元素为：(1)NH4NO3，1650gm/L；(2)KNO3，1900mg/L；(3)CaCl·2H2O，440mg/L；(4)MgSO4·7H2O，370mg/L；(5)KH2PO4，170mg/L；所述微量元素为：(1)MnSO4·H2O，22.3mg/L；(2)ZnSO4·7H2O，8.6mg/L；(3)CoCl·6H2O，0.025mg/L；(4)CuSO4·5H2O，0.02mg/L；(5)H3BO3，6.2mg/L；(6)Na2MO4·2H2O，0.25mg/L；(7)KI，0.83mg/L；所述有机成分为：(1)烟酸，0.5mg/L；(2)盐酸吡哆醇，0.5mg/L；(3)盐酸硫胺素，0.1mg/L；(4)肌醇，100mg/L；(5)甘氨酸，2mg/L；所述铁盐为：(1)FeSO4·7H2O，28.7mg/L；(2)Na2-EDTA，37.3mg/L；所述蔗糖为30000mg/L；所述琼脂为5800～6200mg/L。4.如权利要求2所述的轮叶黑藻组织培养快速繁殖方法，其特征是：所述1/2MS培养基的成分是MS培