南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103125384A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103125384103125384A(43)申请公布日2013.06.05(21)申请号201110394101.8(22)申请日2011.12.02(71)申请人刘家迅地址650224云南省昆明市盘龙区金星小区170-1-203室(72)发明人刘家迅(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页权利要求书2页说明书4页说明书4页(54)发明名称南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法(57)摘要本发明公开了一种南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，它以南海杜鹃的茎尖或一年生嫩枝带腋芽茎段作为外植体，在诱导培养基中诱导产生不定芽，再在增殖培养基中培养出所需的丛生芽，将丛生芽切割成单株植入生根培养基，经生根培养后直接栽于营养钵获得南海杜鹃种苗。本发明之方法高效、快速，通过各培养阶段的激素调节，达到提高繁殖率和减少变异的目的，可用于南海杜鹃的工厂化、规模化生产。CN103125384ACN1032584ACN103125384A权利要求书1/2页1.一种南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于包括下列工艺步骤：A、将经过消毒灭菌处理的南海杜鹃茎尖或带腋芽茎段接种到下列诱导培养基上：WPM培养基在光照强度为1200～1500lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d培养条件下，30～35天，外植体萌发分化成丛生芽，切下丛生芽，进入下一步骤；B、将A步骤切下的丛生芽依次转接至下列增殖培养基中：WPM培养基在光照强度为1200～1500lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d，培养条件下，进行增殖培养，每30～35天，继代一次，得增殖倍数为2.5～3的丛生芽，如此反复进行增殖培养至所需量的丛生芽，并使丛生芽长成2～3节，高1～2cm的芽苗，切下进入下一步骤；C.将B步骤切下的芽苗分成单株，接种到下列生根培养基上，在光照强度为1500～2000lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d条件下，生根培养至芽苗长大并生根；WPM培养基D、将上述C步骤的生根苗移至室外散射光下锻炼一周后，取出生根苗，用清水将苗上的培养基洗净，放入质量浓度为0.1％的多菌灵溶液中消毒1～2分钟，移栽到装有下列基质的的营养钵中：腐叶土∶草炭土∶珍珠岩＝2∶2∶1体积比的基质中，正常养护，即得南海杜鹃种苗。2.如权利要求1所述的南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于所述A步骤的对南海杜鹃外植体进行消毒灭菌处理为：在超净工作台中，将经过清水洗净的1～2cm茎2CN103125384A权利要求书2/2页尖或带芽茎段，依次在体积浓度为70％～75％的酒精中消毒处理20～40秒、在质量浓度为0.1％～0.15％的升汞溶液中灭菌8～15分钟、在体积浓度为1.5％～2％的次氯酸钠溶液中消毒处理15～20分钟，之后用无菌水漂洗2～3次即可。3CN103125384A说明书1/4页南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法技术领域[0001]本发明涉及一种植物的组织培养与快速繁殖方法，尤其是南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，属植物栽培技术领域。背景技术[0002]南海杜鹃为杜鹃花科杜鹃花属马银花亚属常绿杜鹃，灌木至小乔木，高1～5米，叶革质，花期4～5个月，花色紫红色，为我国特有品种，产于广东、海南等地，是为数不多的几种低海拔耐热常绿杜鹃之一，可广泛用于南方地区园林绿化，也是培养耐热常绿杜鹃的优秀亲本，野生品种极少。南海杜鹃种子量小，出苗率低，扦插困难，因此需要寻找一套新的高效可行的繁殖方法来进行繁殖，以满足市场需求。发明内容[0003]本发明的目的在于提供一种南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，以适应大规模生产优质种苗。[0004]本发明以南海杜鹃一年生嫩枝茎段或茎尖作外植体，并在本发明提供的培养基中进行无菌苗诱导和增殖培养，从而建立无菌快繁体系和组培苗移栽体系，达到种苗快速繁殖和生产要求。[0005]本发明通过下列技术方案完成：一种南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于包括下列工艺步骤：[0006]A、将经过消毒灭菌处理的南海杜鹃外植体，即南海杜鹃一年生嫩枝的茎尖与茎段，接种到下列诱导培养基中：[0007]WPM培养基[0008]糖30g/L[0009]琼脂4～7g/L[0010]ZT2～3mg/L[0011]IAA0.5～1mg/L[0012]PH5.0～5.5[0013]在光照强度为1200～1500lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d培养条件下，30～35天，外植体萌发分化成丛生芽。切下丛生芽，进入下一步骤；[0014]B、将A步骤切下的丛生芽依次转接至下列增殖培养基中：[0015]WPM培养基[0