八液相色谱法.ppt

第七章液相色谱(liquidchromatography)第七章液相色谱(liquidchromatography)第七章液相色谱(liquidchromatography)第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-1概述（1）液相色谱简介第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-1概述（2）液相色谱的发展A：高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较
高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，
只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。
高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。
高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g,荧光检测器——10-11g。
B：.HPLC与GC的比较
分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，而这些物质只点有机物总数的20%；HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。
流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。
操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。
第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-1概述（3）液相色谱的分类
两种最常用的色谱法液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不同的组分因分配系数（K)的不同而被分离。目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法（简称键合相色谱法）可以用分配色谱的原理加以解释。键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位，是应用最广的色谱法。按照固定相和流动相极性的不同，分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。1.正相色谱法（normalphasechromatography)流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相分配色谱法，简称为反相色谱法。
反相色谱法使用非极性固定相，最常用的非极性固定相是十八烷基硅烷键合硅胶，还有辛烷基硅烷键合硅胶等。流动相常用水与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合溶剂。在反相色谱中极大的组分因K值较小先流出色谱柱，极性较小的组分后流出。流动相中有机溶剂的比例增加，流动相极性减小，洗脱力增强。反相色谱法是目前应用最广的高效液相色谱法。第七章液相色谱(liquidchromatography)第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（1）液相色谱仪第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（2）液相色谱仪的流程图第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（3）液相色谱仪的工作过程第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（4）液相色谱仪的基本组成系统第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（5）高压泵第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（6）梯度洗脱装置第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（7）进样器六通进样阀可分为定子和转子两部分，共有6个口，故称为六通进样阀。转子通过扳手调节，可以分别处于“装样”和“进样”两个位置。图中a为进样阀处于“装样”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样”位时，进样阀的流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。六通进样阀具有使用方便，进样量准确等优点。样品环有10µl、20µl、50µl等不同容积，可以选配。样品环不仅可以用来贮液，也可用来测量样品溶液的体积。将样品环装满后，进样，进样量即为样品环的容积，此种进样方式称为“满环进样”或“定量环进样”。用定量环进样精密度好，在使用外标法时，应使用此种操作方式。六通进样阀结构如图所示：第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（8）色谱柱第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（9）色谱填料第七章液相色谱(liquidchromatography)§7-2液相色谱仪（10）监测器
常用检测器：紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。(2)光二极管阵列检浏器(photodiodearr