经典液相色谱法.ppt

第10章经典液相色谱法第1节液-固吸附柱色谱法（LSC）吸附过程是试样中组分分子与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心的过程。这种吸附平衡过程可表示为CS为溶质在固定相表面的分析浓度，K值小，说明该物质的吸附能力弱，在固定相中滞留时间短，移动速率快，先流出色谱柱；若K值大，说明该物质的吸附能力强，在固定相中滞留时间长，移动速率慢，后流出色谱柱。在一定条件下，不同组分因吸附系数的差异得以分离。等温线有三种类型：线性、凸形和凹形。通常在低浓度时，每种等温线均呈线性，而高浓度时，等温线则呈凸形（常见）或凹形。二、吸附剂
1.对吸附剂的要求：
(1)表面积大，具有一定的吸附能力。
(2)不应与流动相发生化学反应。
(3)粒度要细，一般为150目左右。结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构
表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心由于硅胶具有弱酸性，能与碱起反应，只适用于分离酸性和中性化合物。酰胺基中的羰基与酚类、黄酮类、酚类中的羟基或羧基形成氢键；酰胺基中的氨基与醌类、硝基类中的醌基、硝基形成氢键而产生吸附作用。硅胶含水量（%）活度级数含水量活性吸附能力
小少大强
大多小弱

加热除水，活性提高，吸附力加强（活化）
吸水，活性下降，吸附力减弱。

1.被分离物质的极性
被分离物质的极性越大,被吸附剂吸附得越牢!
常见的化合物极性大小顺序:
烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<二甲胺<脂类<酮类<醛类<硫醇<胺类<酰胺<醇类<酚类<羧酸类
被分离物质的极性与结构的关系
(1)基本母核相同,基团极性愈大,分子极性愈大。
基本母核相同,极性基团数目愈多,分子极性愈大。2.吸附剂的活性:
吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强
物质的极性吸附剂活性
大小防吸附太牢,难洗脱
小大防tR太小,不易分离常用流动相极性强弱顺序:
石油醚<环己烷<四氯化碳<苯<甲苯<乙醚<氯仿<醋酸乙酯<正丁醇<丙醇<乙醇、甲醇<水

被分离物质的极性吸附剂活性流动相极性
大小大
小大小

流动相可用一元,两元或三元，也可采用梯度洗脱等技术。一、基本原理分配系数小的组分，移动速度快，先流出色谱
柱；分配系数大的组分，移动速度慢，后流出色谱
柱。分配色谱根据固定液和流动相的相对极性，可以分为两类：正相色谱和反相色谱在反相分配色谱中，常以硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂作为固定液，而以极性强的水、水溶液或与水混溶的有机溶剂为流动相。

离子交换平衡常数:

[A+]r、[B+]r分别表示树脂中A、B离子的浓度;
[A+]、[B+]分别表示水液中A、B离子的浓度
若KB/A>1,说明B+较牢地结合在树脂上
KB/A<1,说明A+较牢地结合在树脂上
所以KB/A说明了树脂对A+、B+两种离子选择性交换的能力,故也称之为选择性系数。

用离子交换树脂分离不同离子时，样品组分离子与流动相离子在树脂上产生竞争交换，交换能力弱的离子易被流动相洗脱。选择性系数大的离子交换能力强，保留时间长，后流出色谱柱。结果各种离子按选择性系数的大小顺序被洗脱。磺酸化阴离子交换树脂具有与阳离子交换树脂同样的有机骨架，只是在骨架上引入了可离解的碱性基团，如季胺基(─NR＋3OH－)等，就成为阴离子交换树脂。其交换反应如下：交联度网眼交换速度离子选择性
大小慢小离子好
小大快大小离子差
阳离子交换树脂一般交联度8%
阴离子交换树脂一般交联度4%
2.交换容量:
第4节空间排阻柱色谱法（SEC）体积大的组分完全不能进入凝胶颗粒内的孔隙中，只能经过凝胶颗粒之间的间隙随流动相最先流出色谱柱；而体积小的组分，可渗入凝胶颗粒内的孔隙中，因此在流经凝胶颗粒之间的间隙和全部凝胶颗粒的孔隙之后，最后流出；介于大小分子中间的组分，只能进入一部分颗粒内较大的孔隙，在中间时间段流出。Xm与Xs分别代表在孔外流动相中和凝胶孔隙中同等大小的溶质分子。平衡时，两者浓度之比为渗透系数在凝胶孔径一定时，当分子大到不能进入凝胶所有空隙时（排斥极限），
[XS]=0，则KP=0；
而当分子小到能进入所有空隙时（全渗透），[XS]=[Xm]，KP=1；
分子尺寸在上述两种分子之间时，能进入部分空隙，
0＜KP＜1.排斥极限与全渗透之间对应的分子量范围称为凝胶的分子量范围。选择凝胶时应使试样的分子量落入此范围。固定相将固定相均匀地涂铺在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离分析的方法称为薄层色谱法（TLC）。特点：设备简单，操作方便，分析速度快，分离效率
高，灵敏度高，显色方便，结果直观，预处理简单。
应用：定性、药物杂质检查、纯度测定2.比移值比移值是薄层色谱的基本定性参数，它说明组分在色谱系统中的保留行为。比移值的数值除与组分的性质有关外，还与薄层板的性质(活性等)、展开剂的性质(极性、组成等)和温度有关。讨论