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非洲菊叶柄愈伤出苗再生体系的建立和遗传转化的初步研究 非洲菊(TageteserectaL.)是一种观赏及药用植物,具有丰富的花色和药用价值。为了提高非洲菊的栽培品质和药用价值,研究非洲菊的愈伤出苗再生体系和遗传转化具有重要意义。 一、非洲菊叶柄愈伤出苗再生体系的建立 1.材料和方法 1.1实验材料:非洲菊鲜嫩叶柄 1.2组织培养基:MS培养基 1.3培养条件:温度25±2℃,光照强度2000lx,光照周期16/8h(光/暗),湿度60%左右。 1.4实验设计:分为愈伤组织培养和愈伤出苗培养两个阶段。在愈伤组织培养阶段,利用叶柄作为外植体,诱导出愈伤组织。在愈伤出苗培养阶段,将愈伤组织移植到MS液体培养基中,培养出苗。 2.结果和分析 2.1愈伤组织培养阶段 在MS培养基上加入2,4-D1.5mg/L和BA0.5mg/L,利用叶柄作为外植体,可以有效诱导出非洲菊的愈伤组织。愈伤组织呈现白色、肉质、疏松的生长状态,生长势旺盛。 2.2愈伤出苗培养阶段 将愈伤组织移植到MS液体培养基中,培养出苗。生长周期不同,有些愈伤组织会形成白色蔓延状态,这也是愈伤出苗所特有的情况。 二、非洲菊的遗传转化的初步研究 1.材料和方法 1.1实验材料:非洲菊愈伤组织 1.2实验操作:利用催芽素基因AtGA20ox1和AtGA20ox2构建二元载体pBI121-AtGA20ox1/2,并将其转化到农杆菌EHA105中。利用农杆菌介导法将其转化到非洲菊愈伤组织中。 2.结果和分析 2.1PCR检测 利用PCR方法检测非洲菊愈伤组织是否成功转化,结果呈现了目的基因AtGA20ox1/2的特异性片段,表明转化成功。 2.2遗传稳定性评价 在愈伤组织中不断重复培养,用PCR方法进行检测,一直检测到转基因植株,表明愈伤组织的遗传稳定性较高。 以上是非洲菊叶柄愈伤出苗再生体系的建立和遗传转化的初步研究的结果和分析。非洲菊的愈伤出苗再生体系可以进一步应用于品种选育和功能基因研究;而非洲菊的遗传转化为非洲菊育种和药用价值的提高提供了新的手段,对非洲菊的进一步研究具有重要意义。