抗原-诺罗病毒P-结构域单体和二聚体，抗原-诺罗病毒P-粒子分子，及其制备和应用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102612525A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102612525A(43)申请公布日2012.07.25(21)申请号201080035302.2地址美国俄亥俄州(22)申请日2010.06.09(72)发明人江熙谭明(30)优先权数据(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所61/185,5642009.06.09US1110561/224,6962009.07.10US代理人闵丹(85)PCT申请进入国家阶段日(51)Int.Cl.2012.02.09C07K19/00(2006.01)(86)PCT申请的申请数据C12N15/63(2006.01)PCT/US2010/0380082010.06.09A61K39/295(2006.01)A61P37/00(2006.01)(87)PCT申请的公布数据WO2010/144602EN2010.12.16(71)申请人儿童医院医疗中心权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书2626页页附图附图1414页(54)发明名称抗原-诺罗病毒P-结构域单体和二聚体，抗原-诺罗病毒P-粒子分子，及其制备和应用方法(57)摘要取代的诺罗病毒衣壳蛋白单体，其仅含有P-结构域，被称为抗原-诺罗病毒P-结构域单体，包含通过分子克隆插入到每个P-结构域单体上存在的三个表面环中的一或多个的外来抗原。所述抗原-P-结构域单体可以自发组装成八面体形式，被称为抗原-诺罗病毒P-粒子，后者由24个拷贝的抗原-P-结构域单体构成。每个取代的P-结构域单体含有1到3拷贝的外来抗原，每个抗原-P-粒子上共有24-72个抗原拷贝。所述抗原-P-粒子可用于感染了外来病毒(例如轮状病毒)的个体的诊断、免疫和治疗方法中，还可以作为外来抗原的呈递载体用于开发抗许多感染性和非感染性疾病的新疫苗。取代的诺罗病毒P-粒子可以在大肠杆菌和酵母菌中容易地产生，高度稳定并能耐受广泛的物理化学条件。改造过的诺罗病毒P-结构域单体包含插入到P-结构域单体的三个环中的一或多个环的一或多个限制酶识别位点，提供使用方便的克隆盒用于将候选外来抗原CN10265A插入表面环中。P-粒子-VP8嵌合体还可以作为抗轮状病毒和诺罗病毒的双重疫苗。CN102612525A权利要求书1/1页1.抗原-P-结构域单体，其包含带有至少一个表面环的诺罗病毒(NOR)P-结构域单体和插入到所述至少一个表面环中的蛋白或多肽抗原。2.权利要求1所述的抗原-P-结构域单体，其中所述至少一个表面环包括环1(I293-H297)、环2(T371-D374)和环3(D391-N394)中的至少一者。3.权利要求1所述的抗原-P-结构域单体，其中所述抗原是轮状病毒(RV)VP8抗原。4.权利要求1所述的抗原-P-结构域单体，其中所述蛋白或多肽抗原包括至少两种类似或不同的抗原。5.由24个单体组成的抗原-P-粒子，所述P-粒子包括至少一个权利要求1所述的抗原-P-结构域单体，和任选的一或多个野生型NORP-结构域单体，其中所述抗原-P-粒子与单独的该抗原相比，可以使抗原的免疫原性增强。6.P-结构域单体载体，其包含带有至少一个表面环的NORP-结构域单体，其中所述至少一个表面环包括至少一对限制性位点。7.权利要求6所述的P-结构域单体载体，其中所述至少一个表面环包括环1(I293-H297)、环2(T371-D374)和环3(D391-N394)中的至少一个。8.权利要求6所述的P-结构域单体载体，其中所述至少一个表面环包括间隔分子来延伸所述至少一个表面环的长度和暴露情况。9.给哺乳动物提供抗病毒性抗原的免疫保护作用的方法，其包括将权利要求5所述的抗原-P-粒子作为疫苗给予哺乳动物的步骤。10.权利要求9所述的方法，其中所述抗原是RVVP8抗原，其中P-粒子-VP8嵌合体作为抗轮状病毒和诺罗病毒的双重疫苗。11.权利要求1所述的抗原-P-结构域单体，其中所述至少一个表面环是三个环，且其中该单体的三个环上插入多个不同的抗原，以防止诸如RVVP8之类大抗原遮盖带有较小外来抗原的相邻环、而使小表位难以在该环上呈递。12.权利要求1所述的抗原-P-结构域单体，其中所述P-结构域单体的一或多个表面环中被插入配体或信号肽，导致自发形成在一或多个远端表面上带有插入的配体或信号肽的取代的P-粒子。13.权利要求12所述的抗原-P-结构域单体，其中所述插入的配体或信号肽使得取代的P-粒子能够靶向具体器官或组织中的相应受体、并前往这些位置。14.权利要求13所述的抗原-P-结构域单体，其中所述取代的P-粒子有肽CNGRC(5个氨基酸)插入到该P-结构域单体的一或多个表面环中。15.权利要求1所述的抗原-P-结构域单体，其中所述取代的P-粒子单体