抗原‑诺罗病毒P ‑结构域单体和二聚体，抗原‑诺罗病毒P‑粒子分子，及其制备和应用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107043408A(43)申请公布日2017.08.15(21)申请号201710198133.8C07K19/00(2006.01)(22)申请日2010.06.09(30)优先权数据61/185,5642009.06.09US61/224,6962009.07.10US(62)分案原申请数据201080035302.22010.06.09(71)申请人儿童医院医疗中心地址美国俄亥俄州(72)发明人江熙谭明(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所11105代理人张晓飞(51)Int.Cl.权利要求书2页说明书26页C07K14/08(2006.01)序列表3页附图13页(54)发明名称抗原-诺罗病毒P-结构域单体和二聚体，抗原-诺罗病毒P-粒子分子，及其制备和应用方法(57)摘要取代的诺罗病毒衣壳蛋白单体，其仅含有P-结构域，被称为抗原-诺罗病毒P-结构域单体，包含通过分子克隆插入到每个P-结构域单体上存在的三个表面环中的一或多个的外来抗原。所述抗原-P-结构域单体可以自发组装成八面体形式，被称为抗原-诺罗病毒P-粒子，后者由24个拷贝的抗原-P-结构域单体构成。每个取代的P-结构域单体可以含有1到3拷贝的外来抗原，每个抗原-P-粒子上共有24-72个抗原拷贝。所述抗原-P-粒子可以用于感染了外来病毒(例如轮状病毒)的个体的诊断、免疫和治疗方法中，还可以作为外来抗原的呈递载体用于开发抗许多感染性和非感染性疾病的新疫苗。CN107043408ACN107043408A权利要求书1/2页1.重组的抗原-P-结构域单体，其包含带有至少一个表面环的诺罗病毒(NOR)P-结构域单体，所述至少一个表面环中包括插入的外源蛋白或多肽抗原。2.权利要求1的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述NORP-结构域单体包括第一环、第二环、和第三环，其中至少一个表面环选自所述第一环、第二环、和第三环。3.权利要求1或2的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述P-结构域单体包括铰链和与该P-结构域单体任一末端相连的半胱氨酸。4.权利要求1或2的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述P-结构域单体不包括铰链。5.权利要求2-4之一所述的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述NORP-结构域单体是NOR病毒株VA387的P-结构域，且所述第一环是环1(I293-H297)、第二环是环2(T371-D374)、第三环是环3(D391-N394)。6.权利要求1-5之一所述的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述插入的外源蛋白或多肽抗原是轮状病毒(RV)VP8抗原。7.权利要求1-6之一所述的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述插入的外源蛋白或多肽抗原包括至少两种类似或不同的抗原。8.权利要求7所述的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述至少两种抗原是不同的。9.由24个P-结构域单体组成的抗原-P-粒子，所述24个P-结构域单体包括至少一个重组的抗原-P-结构域单体，和任选的一或多个野生型NORP-结构域单体，其中所述重组的抗原-P-结构域单体是带有至少一个表面环的诺罗病毒(NOR)P-结构域单体、且所述至少一个表面环中包括插入的外源蛋白或多肽抗原，其中所述抗原-P-粒子与单独的该抗原相比，可以使抗原的免疫原性增强。10.权利要求9所述的抗原-P-粒子，包括两个或更多个经不同修饰的重组的抗原-P-结构域单体。11.权利要求1-8之一所述的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述至少一个表面环是三个环，且该三个环的每一个包括插入的多个不同的外源抗原。12.权利要求1-8之一所述的重组抗原-P-结构域单体，其中所述至少一个表面环中还包括插入的外源配体或信号肽。13.权利要求12所述的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述插入的外源配体或信号肽靶向具体器官或组织中的相应受体。14.权利要求13所述的重组的抗原-P-结构域单体，其中所述插入的外源信号肽是5个氨基酸的CNGRC。15.权利要求1-8之一所述的重组的抗原-P-结构域单体，还包括通过化学反应借助暴露在表面的赖氨酸和半胱氨酸插入到P-粒子的环中的药物偶联物。16.权利要求1-8之一所述的重组抗原-P-结构域单体，还包括插入在至少一个表面环中的配体或信号肽、以及插入在至少一个表面环中的药物偶联物，从而提供了药物递送系统将药物定靶到患病的具体组织或器官。17.重组的P-结构域单体载体，其在编码NORP-结构域单体的表面环的序列中包括至少一对限制性位点。18.权利要求17所述的重组的P-结构域单体载体，其中所述至少一对限制性位点位于编码至少一个选自下组的表面环的序列内：环1(I293-H297)、环2(T371-D374)和环3(D391-2CN107