酶与细胞的固定化不考.ppt

第五章酶与细胞的固定化克服游离酶缺点的方法:第一节酶与细胞的固定化方法(1)氨基酸生产，利用固定化细胞生产L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-色氨酸、L-精氨酸。
(2)抗生素生产，用固定化细胞生产杆菌素、四环素、头孢菌素等。
(3)利用固定化细胞生产单克隆抗体、生长因子等、活性蛋白质药物、还可生产维生素B、维生素C中间体、山梨糖、氢化可的松等维生素和甾体激素系物质。二固定化方法吸附法酶的吸附剂一般胶原蛋白载体预先制成膜状(胶原膜)，胶原膜溶胀、然后浸入酶溶液，酶渗入膜内并被吸附，制成酶膜。也可以通过含有酶的胶原分散液进行电沉积制得。由这些方法制得的两膜每克胶原可含有5—50mg酶。2.包埋法缺点:包埋法对底物分子和产物分于的大小有所限制。当底物和产物的相对分子质量小时，则扩散阻力小。海藻酸盐包埋酶或细胞的一般操作方法缺点:（2）K-角叉菜糖包埋法（3）聚丙烯酰胺凝胶调节单体和交联剂的用量可以改善聚丙烯酰胺凝胶的渗透性。
在单体丙烯酰胺浓度不变时，交联剂用量以5％为最好。此时，凝胶的有效孔径最小，因而渗透性最小。如交联剂含量高于5％，渗透性反而增加，不利于酶的固定。这现象可能是由于聚合时一些线性纤维被堆积成为一股股的纤维束，因而纤维束之间的距离变宽。如果单体浓度增加．则被包埋的蛋白质的量将增加。但是，当单体浓度高于15％时，被包埋的酶的活性却急剧下降。这显然是因为丙烯酰胺对酶起着变性剂的作用。3.交联法4.化学共价法能够用于共价法固定的酶蛋白上的功能基团有：对于共价偶联反应的选择一般应考虑到酶蛋白上供共价结合的功能基团必须不影响酶的催化活性；反应条件必须尽可能温和；而且最好能在水溶液中进行反应。偶联反应应该对酶蛋白上某一类功能基团有很高的专一性，而对其他功能基团或水溶液几乎无副反应。A酰化反应B芳化和烷基化反应
酶蛋白与某些含有卤代芳环或者卤代杂环的聚合物相互作用，酶蛋白上的氨基通过芳化而偶联。芳化聚合物为3—氟-4，6—二硝基苯基时C溴化氢法
在碱性(PH10.0一11.5）下用溴化氰使多糖类物质活化形成环化的亚氨碳酸盐，然后此活性聚合物能在温和的PH下与酶蛋白中氨基偶联并使酶固定；D重氮化反应
带有芳氨基侧链的聚合物用亚硝酸处理后可以得到含芳香族重氮化基团的活性载体当这种活性载体与酶在pH8—9下作用时，通过酶蛋白酪氨酸残基上的酚羟基以及组氨酸残基上的咪唑基发生偶联，形成相应的偶联化合物，从而使酶固定。5.逆胶束酶反应系统第二节固定化酶和固定化细胞的应用3.游离酶进行分批式水解在工业上的缺点：4.固定化酶的应用二.在抗生素生产方面的应用三.生产葡萄糖和果葡糖浆四.分析化学方面的应用五.应用于环境检测中