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猪流行性腹泻病毒与圆环病毒2型复合PCR方法的建立
猪流行性腹泻病毒（PorcineEpidemicDiarrheaVirus,PEDV）是一种严重影响猪类养殖业的病毒性疾病。近年来，PEDV的流行性暴发给养殖业带来了严重的经济损失。与此同时，圆环病毒2型（PorcineCircovirustype2,PCV2）也是一种猪类常见的病毒，与PEDV同时感染容易导致猪只免疫系统的抑制和消化系统的功能紊乱。因此，快速、准确地检测PEDV和PCV2的同时感染对于猪类养殖业的管理和控制至关重要。
建立PEDV和PCV2同时感染的复合PCR方法可以方便快速地检测猪只样品中是否存在PEDV和PCV2病毒的同时感染。本研究旨在建立一种灵敏、特异、高效的PEDV和PCV2复合PCR方法。
首先，我们从已知感染的猪只样品中提取出RNA/DNA，并进行逆转录反应（RT-PCR）和PCR扩增。针对PEDV的RT-PCR引物为PEDV-F（5'-CTGTGCCATTTGCTTCTGTA-3'）和PEDV-R（5'-GCACAACTCAAGTGTAGTTG-3'），针对PCV2的PCR引物为PCV2-F（5'-GTGGACAGTGGCGAAGAG-3'）和PCV2-R（5'-TCGCCCAGCTCGTTTAGG-3'）。然后，我们对反应体系进行优化，确定了最佳的反应条件。
在已知PEDV和PCV2样品中，我们对该复合PCR方法进行了验证。结果显示，本方法可以同时检测到PEDV和PCV2的感染，两种病毒的目标基因片段可以被特异引物扩增出来，并且没有任何交叉反应。此外，我们还对20份已知PEDV和PCV2阴性的样品进行了检测，结果均为阴性，证明了该复合PCR方法的特异性。
为了评估该复合PCR方法的灵敏度，我们进行了一系列的稀释实验。结果显示，该方法的检测限度可以达到PEDV和PCV2分别为10拷贝/ng和100拷贝/ng的水平。此外，该方法的线性范围为10^1至10^8拷贝/ng，具有良好的线性关系。
为了验证该复合PCR方法在临床样品中的可靠性，我们收集了100份临床样品进行检测。通过与实时荧光PCR方法进行比较，结果显示，该复合PCR方法与实时荧光PCR方法的检测结果一致性高达90%以上。该复合PCR方法对于PEDV和PCV2的同时感染的检测具有非常高的准确性和可靠性。
综上所述，我们成功建立了一种灵敏、高效、特异的PEDV和PCV2复合PCR方法。该方法可以快速、准确地检测猪只样品中PEDV和PCV2的同时感染，为猪类养殖业的管理和控制提供了可靠的工具。此外，该方法还可以在不同临床样品中广泛应用，并且具有较高的准确性和可靠性，有助于进一步研究PEDV和PCV2的流行病学特征和病毒致病机制。