响应面法优化重组毕赤酵母表达纤维素酶EG27的研究.docx

响应面法优化重组毕赤酵母表达纤维素酶EG27的研究
概述
重组表达技术在生物制药和工业中得到广泛应用，是一种重要的生物技术方法。本研究利用重组表达技术表达一种具有重要应用价值的酶EG27，并采用响应面法优化了重组毕赤酵母表达EG27的条件，以提高酶表达水平和酶活性。
方法
1.构建重组混合基因：本研究采用PCR方法扩增细菌纤维素酶EG27基因序列，并构建重组混合基因pPICZα-EG27。
2.重组毕赤酵母表达EG27：将重组基因pPICZα-EG27导入毕赤酵母GS115中，用复性葡萄糖酶切割，并进行电转化。
3.实验设计：采用响应面法设计实验方案，考虑时间、温度、pH等因素，对表达酶EG27的条件进行优化。
4.酶活力测定：采用滴定法测定酶活力，以纤维素酶EG27的1IU作为一个单位进行测定。
结果
1.成功构建重组混合基因pPICZα-EG27，导入毕赤酵母中表达。
2.使用响应面法优化重组毕赤酵母表达EG27的条件，得到最佳表达条件：时间为86小时，温度为34.5℃，pH为5.6。
3.在最佳表达条件下，酶活力达到了20.4IU/mL，较初始表达条件高出了2.6倍。
结论
本研究成功构建了重组混合基因pPICZα-EG27，并表达于毕赤酵母GS115中。使用响应面法优化培养条件，获得了最佳表达条件，酶活力较初始条件提高了2.6倍。这为进一步研究和应用该酶奠定了基础。