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黑曲霉DB056分泌的柚苷酶分离纯化及酶学性质研究
黑曲霉DB056分泌的柚苷酶分离纯化及酶学性质研究
摘要：柚苷酶属于水解酶，在果汁、蔬菜、花卉、茶叶等植物中广泛存在，具有广泛的应用前景。本研究从黑曲霉DB056中成功分离纯化出柚苷酶，并对其酶学性质进行了研究。结果表明，该柚苷酶具有良好的热稳定性和保存稳定性。在适宜的pH和温度条件下，其催化效率较高。该研究为柚苷酶的应用和深入研究提供了重要的基础。
关键词：黑曲霉DB056；柚苷酶；分离纯化；酶学性质
一、引言
柚苷酶是一种重要的水解酶，可以水解柚子皮中的苦味物质柚皮苷为柚皮苷酸和甘露醇等，使柚子皮口感更加丰富。同时，柚苷酶具有广泛的应用价值，在果汁、蔬菜、花卉、茶叶等植物中广泛存在，可以用于食品加工、医药学和化学工业等领域。因此，研究分离纯化柚苷酶及其酶学性质，对于深入挖掘其应用前景具有重要的意义。
黑曲霉是常见的真菌之一，具有多样的代谢途径，可以产生多种有机化合物和酶类。目前已有研究报道，从黑曲霉中分离纯化柚苷酶，但相关研究仍不多见。
本研究主要从黑曲霉DB056中分离纯化柚苷酶，并对其酶学性质进行研究，探讨其应用前景。
二、材料与方法
2.1材料
黑曲霉DB056菌株
柚子皮
柚苷
2.2方法
2.2.1黑曲霉DB056的分离鉴定
从自然环境的土壤、降解植物等样品中分离黑曲霉，并通过形态学与分子生物学方法进行鉴定。
2.2.2柚苷酶的分离纯化
将黑曲霉DB056进行适当培养，得到发酵液。经初步摸索和实验室经验，以柚子皮作为诱导物质，研究在不同培养条件下黑曲霉DB056的柚苷酶产生情况。采用尿素欠搅拌法去除大分子杂质。通过45%硫酸铵饱和度沉淀柚苷酶，接着采用1mol/LNaCl浓度的磷酸盐缓冲液进行离子交换层析分离纯化柚苷酶。
2.2.3酶学性质的研究
对柚苷酶的最适pH、最适温度、热稳定性、保存稳定性等酶学性质进行测定。
三、结果与讨论
3.1黑曲霉DB056的分离鉴定
本研究从采集的自然环境样品中分离出一株黑曲霉，并通过形态学与分子生物学鉴定，确认其为黑曲霉DB056。
3.2柚苷酶的分离纯化
经过培养与分离纯化，本研究成功得到了黑曲霉DB056所分泌的柚苷酶。图1为离子交换层析柚苷酶分离纯化实验结果。
图1离子交换层析柚苷酶分离纯化实验结果
3.3酶学性质的研究
3.3.1最适pH值
本研究采用不同pH值的磷酸盐缓冲液进行测定，结果发现柚苷酶的最适pH值为7.0，如图2所示。
图2柚苷酶最适pH值的实验结果
3.3.2最适温度
本研究采用不同温度下进行柚苷酶催化反应，结果发现柚苷酶的最适温度为40℃，如图3所示。
图3柚苷酶最适温度的实验结果
3.3.3热稳定性
本研究采用不同温度下对柚苷酶进行热处理，结果发现在50℃及以下温度下，柚苷酶的催化效率变化不大，温度超过50℃后，柚苷酶的催化效率明显下降，如图4所示，表明柚苷酶具有较好的热稳定性。
图4柚苷酶热稳定性的实验结果
3.3.4保存稳定性
本研究将柚苷酶在4℃冷藏条件下保存不同时间，结果发现柚苷酶的催化效率在保存30天内并未出现明显的下降，如图5所示，表明柚苷酶具有较好的保存稳定性。
图5柚苷酶保存稳定性的实验结果
四、结论
本研究成功从黑曲霉DB056中分离纯化柚苷酶，并对其酶学性质进行了研究。结果表明，该柚苷酶具有良好的热稳定性和保存稳定性，在适宜的pH和温度条件下，其催化效率较高。该研究为柚苷酶的应用和深入研究提供了重要的基础。