19-酶的分离纯化及酶学性质研究.pdf

酶的分离纯化---介绍酶分离纯化的步骤、原则和评价方法酶的分离提纯酶分离纯化的目的：研究酶的性质、作用、反应动力学、结构与功能的关系、阐明代谢途径；作为生化试剂和药物。酶提纯主要包括：酶制剂的浓缩；杂蛋白和杂质的去除分离纯化方法的衡量指标总活力回收；比活力提高的倍数。材料机械、化学，组织/细胞酶总活力处理破碎,蛋白质释放比活力离心缓冲液、离子浓度pH，蛋酶总活力酶抽提白质溶解到缓冲液，比活力回的收离心分率盐析、有机溶剂、等电点离分离酶总活力提、吸附、超滤，缩小体积比活力纯纯离子交换、凝胶过滤、疏化过水层析、亲和层析、高效酶总活力倍程纯化液相、快速蛋白质液相层比活力数析、电泳、结晶电泳、结晶、溶解度、高酶总活力效液相，二种以上鉴定比活力分子量、等电点、活性评价指标总活力=活力单位数/ml×总体积（ml）比活力=活力单位数/mg蛋白（氮）=总活力单位数/总蛋白（氮）mg纯化倍数=每次比活力/第一次比活力回收率=每次总活力/第一次总活力某科研人员在对酶分离纯化过程中得到以下实验结果：请根据上述实验结果回答以下问题：⑴在六部分离纯化过程中，哪一步（A）分离效果最好，哪一步（B）分离效果最差？依据是什么？⑵上述A和B步骤分离纯化方法的原理是什么？⑶该酶是否已经纯化？还可以用什么方法确定其纯度？分离步骤总蛋白质含量(mg)活力单位数1粗分离2000040000002盐析500030000003等电点分离400010000004离子交换2009000005亲和层析507500006分子筛层析45675000分离步骤总蛋白含量mg活力单位数比活力回收率纯化倍数1粗分离20000400000020010012盐析500030000006007533等电点分离40001000000250251.254离子交换200900000450022.522.55亲和层析507500001500018.75756分子筛层析456750001500016.8875取XXmL酶液测定其取XXmL酶液测定其中总活力数/总蛋中蛋白质的含量，酶活力单位数，换算白含量换算总蛋白含量活力单位数回收率=100*每一步的活力单位数/第一步的活力单位数纯化倍数=每一步的比活力/第一步的比活力宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化纯化步骤总蛋白总活力比活力纯化倍数回收率（mg）（U）（U/mg蛋白）（%）1、粗酶液8043205411002、乙醇沉淀2935851232.27833、醋酸钙沉淀2129801412.64694、盐析417714648.52415、丙酮沉淀11166110420.29276、结晶0.12130107219.703