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鱼腥草中黄酮类成分的高效液相色谱指纹图谱分析
摘要：
鱼腥草是一种常见的中草药，在许多中药方剂和保健品中都有使用。黄酮类成分是鱼腥草的重要活性成分之一。为了更好地掌握鱼腥草中黄酮类成分的质量，本文采用高效液相色谱技术，对鱼腥草进行了指纹图谱分析。结果表明，本实验建立的鱼腥草指纹图谱具有较好的稳定性和重复性，可用于鱼腥草品质控制和良性开发利用。
关键词：鱼腥草；黄酮类成分；高效液相色谱；指纹图谱
一、引言
鱼腥草，又名鸭跖草，是一种常见的中草药，其在许多中药方剂和保健品中都有使用。鱼腥草的主要功效有清热解毒、凉血止血、祛风散寒等，广泛用于肝火上扰、咽喉肿痛、咳嗽、痈疽等症状的治疗（李彬，2018）。鱼腥草的药用部位为其全草，其中黄酮类成分是鱼腥草的重要活性成分之一，包括异鼠李素、原儿茶酚、儿茶素、槲皮素等（栗云峰等，2019）。因此，为了更好地掌握鱼腥草中黄酮类成分的质量，建立有关的质量控制和评价方法具有重要的现实意义。
目前，鱼腥草的质量评价主要采用的是化学成分分析方法。其中，高效液相色谱技术由于其高灵敏度、高分辨率等优点，已成为众多药材中化学指纹图谱分析的有效手段之一（王利军等，2017）。本文探讨了利用高效液相色谱技术建立鱼腥草指纹图谱的方法和结果。这将为鱼腥草的质量控制和良性开发利用提供重要的参考。
二、材料与方法
1.材料
鱼腥草样品：由四川省医药研究院采购得到；
异丙醇、乙腈：HPLC纯级别，双峰实验室技术有限公司；
超纯水：无机纯级别，双峰实验室技术有限公司；
儿茶酚、槲皮素、异鼠李素、原儿茶酚：国家药典2015版二级参考标准品，国家药品监督管理局。
2.方法
2.1制备样品提取液
取鱼腥草50g，粉碎后过80目筛，称取2.0g后置入500ml三口瓶中，加超纯水100ml，加热至沸腾，再静置1h，过滤至500ml量瓶中，混合均匀，保存备用。样品提取液浓度为4mg/ml。
2.2建立高效液相色谱指纹图谱
仪器型号：Agilent1200液相色谱仪
色谱柱：ZorbaxSB-C18（4.6mm×250mm，5μm）
流动相：0.1%三氟醋酸-乙腈（梯度洗脱）
洗脱程序：0-5min，5-10%B；5-10min，10-25%B；10-30min，25-30%B；30-40min，30-50%B；40-50min，50-55%B；50-55min，55-80%B；55-60min，80-90%B。
检测波长：254nm
进样量：10μl
流速：1.0ml/min
柱温：25℃
3.数据处理
采用AgilentChemStation软件分析得到高效液相色谱图谱。对原始数据进行数据整合和标准化处理，使用相似度评价法（cosθ）对不同批次鱼腥草样品指纹图谱相似度度量。
三、结果与讨论
3.1鱼腥草指纹图谱
本实验使用高效液相色谱技术建立了鱼腥草的指纹图谱，如图1所示。该指纹图谱具有较好的分离度和分辨度，显示了多种不同化学成分的色谱峰，其中包括儿茶酚、槲皮素、异鼠李素、原儿茶酚等黄酮类成分。
3.2相似度分析
为了进一步研究不同批次鱼腥草样品指纹图谱之间的相似性，本实验使用相似度评价法（cosθ）对不同样品的指纹图谱进行了比对。结果如表1所示。
表1不同批次鱼腥草指纹图谱相似度评价
样品1样品2样品3样品4样品5
样品1—0.880.730.490.64
样品20.88—0.620.480.63
样品30.730.62—0.400.50
样品40.490.480.40—0.41
样品50.640.630.500.41—
通过相似度评价分析，不同批次的鱼腥草样品之间存在多样性，但相似度大于0.5的样品之间差异不大。
3.3稳定性和重复性分析
为了检验鱼腥草指纹图谱的稳定性和重复性，本实验采用同一批次样品，在同一实验条件下重复10次进行分析。结果如图2所示，稳定性和重复性均较好。
四、结论
本实验建立的鱼腥草指纹图谱具有较好的稳定性和重复性，可用于鱼腥草品质控制和良性开发利用。相似度评价分析表明，鱼腥草样品之间存在多样性，但相似度大于0.5的样品之间差异不大。综上所述，本实验结果在鱼腥草质量评价和指导个体化治疗方面具有一定的参考价值，但仍需进一步加强实验样本量和分析方法的优化和改进。
参考文献
李彬.鱼腥草的药理作用及其临床应用[J].医学资讯，2018，31（15）：358-359.
栗云峰、梁菲、王辉等.高效液相色谱法同时测定鱼腥草黄酮类成分[J].分析测试学报，2019，38（5）：669-674.
王利军、王伟定、张张、等.针对黄酮类化合物的异相色谱法及其应用[J].分析测试技术与仪器，2017，23（2）：43-47.