植物实时荧光定量PCR内参基因的选择_胡瑞波综述.pdf

中国农业科技导报,2009,11(6):30-36
JournalofAgriculturalScienceandTechnology

植物实时荧光定量PCR内参基因的选择

胡瑞波,范成明,傅永福
(中国农业科学院作物科学研究所,国家农作物基因资源与遗传改良重大科学工程,北京100081)

摘要:实时荧光定量RTPCR(realtimequantitativereversetranscriptionPCR,qRTPCR)具有定量准确、灵敏
度高和高通量等特点,已被广泛应用于基因的表达分析。常规qRTPCR采用相对定量进行分析,其关键步骤
是选择合适的稳定内参基因进行校正和标准化。持家基因被广泛用作内参基因,但在所有生理条件下均稳
定表达的理想内参基因并不存在。大多数传统内参基因已不能满足qRTPCR准确定量的要求。基于基因芯
片表达数据和EST数据库并结合qRTPCR,可以筛选稳定性好的新的内参基因。简要综述了植物qRTPCR
内参基因的研究进展,并就内参基因的选择中应注意的问题进行了探讨。
关键词:实时荧光定量RTPCR;内参基因;geNorm;基因表达
中图分类号:Q789文献标识码:A文章编号:10080864(2009)06003007

ReferenceGeneSelectioninPlantRealtimeQuantitative
ReverseTranscriptionPCR(qRTPCR)

HURuibo,FANChengming,FUYongfu
(InstituteofCropScience,NationalKeyFacilityofCropGeneResourceandGeneticImprovement,
ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081,China)

Abstract:RealtimequantitativeRTPCR(qRTPCR)technology,withquantitativeaccuracy,highsensitivityand
highthroughputcharacteristics,hasbeenwidelyusedingeneexpressionanalysis.Basedontherelativequantitative
analysis,qRTPCRdatamustbenormalizedwithoneormoreproperandstableinternalreferencegenes.House
keepinggenesarecustomarilyusedasendogenousreferencesforrelativequantification.Butnotasinglegenecanact
asauniversalreferencereportedsofar.Mostofthetraditionalhousekeepinggenesareunabletoensureaccurate
normalizationinqRTPCR.BasedonthetremendousgenechipexpressiondataandpublicdepositedESTdata,new
referencegeneswithsuperiorstabilitywereselectedandverifiedwithqRTPCR.Theresearchprogressofreference
genesinplantqRTPCRwasreviewedandaspectstobeconsideredinfuturereferencegeneselectionwerealso
discussed.
Keywords:realtimequantitativereversetranscriptionPCR;referencegenes;geNorm;geneexpression

实时荧光定量RTPCR(realtimequantitative进行校正和标准化[3,4]。qRTPCR结果的准确性
reversetranscriptionPCR,qRTPCR)是在传统在很大程度上取决于内参基因的选择。本文就植
PCR技术基础上发展起来的一种新的核酸定量物qRTPCR内参基因的研究进展作简要综述。
技术,具有定量准确、灵敏度高、重复性好、高通量
等特点,已被广泛应用于基因的表达分析[1,2]。1内参基因的选择标准
在qRTPCR中,为了去除不同样本在RNA产量、
质量和反转录效率上可能存在的差别而获得目标理想的内参基因应满足以下条件:在不同