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HPLC方法研究土霉素在南美白对虾体内药物代谢及残留消除规律
引言
南美白对虾是外销海鲜市场中的常见品种，由于其口感美味，备受消费者喜爱。但是，近年来，南美白对虾残留的抗生素问题引起了人们的关注。土霉素是一种广谱抗生素，被广泛用于家禽养殖和水产养殖过程中的疾病预防和治疗，但也会从养殖环境进入到南美白对虾体内，经过一定时间便会形成土霉素残留。因此，了解土霉素在南美白对虾体内药物代谢及残留消除规律是十分必要的。
材料与方法
试验材料
南美白对虾（Litopenaeusvannamei）200只，体重20±2g，来自于某水产养殖基地。
试剂
土霉素（purity≥98%）。
试验设备
Agilent1260高效液相色谱仪，AgilentSB-C18色谱柱（5μm，4.6mm×250mm），WatersXbridgeC18色谱柱（5μm，4.6mm×100mm），DELTAVisionElite高分辨显微镜。
药物给药
将土霉素以食品饵料的形式混合喂食南美白对虾，喂食剂量为10mg/kg体重，每天喂食一次，连续喂养15天。利用食品饵料喂食土霉素是目前应用最广泛的方法，同时也是最适合的方法，因为它能够模拟真实场景下土霉素在水产养殖基地中的使用方式。在喂食过程中，观察南美白对虾的生理状况，控制水质和饲料的质量。
样品制备
收集南美白对虾在给药后的第1天、第5天、第10天、第15天以及停药后不同时间（1、3、5、7、10、15天）的组织样品，包括肝脏、肌肉、脂肪和皮肤。每个样品选取3只不同体重的南美白对虾，取体重相同的组织混合均匀后再打粉。
样品处理
取0.5g组织粉末，加入5mL甲酸溶液并使用超声波处理器进行超声曲波处理。再加入10mL甲酸-丙酮溶液混合液，离心后滤过1μm的膜，去掉沉淀，最后离心过滤膜为5μm的柱吸入器准备进入高效液相色谱仪。
HPLC条件
1.柱温：35℃
2.流速：1.0mL/min
3.检测波长：360nm
4.进样量：20μL
5.移动相：10mmol/L磷酸二氢钾（pH=3.5）-乙腈=82:18（V/V）
结果与分析
土霉素在南美白对虾体内代谢
土霉素在南美白对虾体内的代谢途径可分为两种，一种是被代谢为降解产物，另一种是被代谢为活性代谢物。土霉素代谢为降解产物主要是通过脂肪组织代谢，尤其是在给药初期，而土霉素代谢为活性代谢物主要通过肝脏代谢，并且随着给药时间的延长，活性代谢物代谢量逐渐增加。
土霉素在南美白对虾体内的残留消除规律
在停药后1天，土霉素在所有组织中的残留量均超过了美国食品药品管理局（FDA）规定的最大残留限量（0.5mg/kg）。停药后3天，土霉素在肝脏和脂肪组织中的残留量已经明显下降，但在肌肉和皮肤组织中的残留量仍然较高。停药后5天，土霉素在肝脏、肌肉和脂肪组织中的残留量均已低于最大残留限量，但在皮肤组织中仍然高于最大残留限量。停药后7天，土霉素在所有组织中的残留量均低于最大残留限量。在停药后10天和15天，土霉素几乎已在所有组织中完全消除。
结论
本研究对土霉素在南美白对虾体内的药物代谢和残留消除规律进行了研究。土霉素在南美白对虾体内的代谢途径主要是通过脂肪组织和肝脏代谢，并且随着给药时间的延长，活性代谢物代谢量逐渐增加。在停药后，土霉素在所有组织中的残留量均超过了FDA规定的最大残留限量，但在停药后5天，土霉素在肝脏、肌肉和脂肪组织中的残留量均已低于最大残留限量，且在停药后7天，土霉素在所有组织中的残留量均低于最大残留限量。因此，在集约化水产养殖中，应严格控制土霉素的使用量和使用方法，以减少土霉素在水产产品中的残留，保障消费者的健康。