大鼠弓状核内神经紧张素能和P物质能阳性结构的免疫电镜双标记研究.docx

大鼠弓状核内神经紧张素能和P物质能阳性结构的免疫电镜双标记研究
引言
神经系统是一个极为复杂的系统，其中包含着各种神经递质和神经调控机制。其中，神经肽类调节物质和神经递质的作用在神经调控中起着重要的角色。神经肽类调节物质如P物质、神经肽Y等，在神经递质释放和神经元活动中发挥着不可忽视的作用；而神经递质如血管紧张素II等，则具有收缩血管、增加心率等作用。因此，对于不同神经递质和神经肽类调节物质在神经元中的位置和相互作用进行研究，对于搞清神经系统调控机制具有重要意义。
本研究选取大鼠弓状核，旨在探究神经肽类调节物质P物质和神经调控递质血管紧张素II在该区域内的表达。通过免疫电镜双标记技术，确定该两种物质在弓状核中的位置及其相互作用。
材料与方法
动物实验：使用雄性大鼠，体质量为250-300g，由于实验中需要床上训练，因此需提前一个星期完成训练，并训练至每只大鼠连续两天都完成稳定的行为表现。麻醉：大鼠在手术前30分钟对其进行麻醉，麻醉方法为皮下注射：氯化钠(150mg/kg)+硫酸镁(80mg/kg)+氯化钾(10mg/kg)。行为表现的观察：行为观察时间从手术结束开始，每个大鼠观察至少6h，观察到它们不连续觉醒，平卧状态，无明显疼痛，对外界无反应时，即可停止观察。
取脑组织样本：选取浓缩的弓状核样本，分别切片处理，切片厚度为80nm。
免疫电镜双标记实验：首先进行P物质免疫反应，采用单倍抗体法，二抗为羊抗小鼠IgG，标记物为金粒。同理，进行血管紧张素II的免疫反应，二抗与标记物均相同。双标记时，将两种标记混合均匀，用其进行样本处理，观察样本中两种物质的共存情况。
结果
通过免疫电镜双标记研究，我们在大鼠弓状核内确定了具有P物质和血管紧张素II免疫反应样本。观察到的金标记点数明显增加，且两种物质标记点有重叠，提示两种物质在该区域内的共存。
讨论
在神经系统中，神经递质和神经肽类调节物质具有复杂的相互作用效应。本研究通过免疫电镜双标记技术，发现了弓状核内两种物质的共存，预示神经肽P物质和血管紧张素II在该区域内可能共同调控神经元的活动，发挥着不同作用。
结论
通过本次免疫电镜双标记研究，成功确定大鼠弓状核中神经肽P物质和神经调控递质血管紧张素II的位置和相互作用。进一步的实验和研究，可以进一步明确两种物质在弓状核中的调控机制，为进一步解析神经系统调控机制提供重要理论基础。