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启动子cbh1的改造与里氏木霉通用质粒载体的构建
启动子cbh1的改造与里氏木霉通用质粒载体的构建
摘要：
启动子是基因表达调控中的重要元件，其在生物体内具有启动基因转录的功能。里氏木霉（Trichodermareesei）作为一种重要的真菌工业菌株，其生物质降解能力受到启动子cbh1的调控。本研究旨在通过改造cbh1启动子及构建通用质粒载体，以提高里氏木霉的生物质降解能力。
1.引言
生物质降解是目前研究的热点之一，对于解决能源危机和环境污染问题具有重要意义。里氏木霉作为一种典型的生物质降解真菌，其代谢产物中含有丰富的纤维素酶。cbh1启动子在里氏木霉中具有重要的调控作用，因此改造该启动子可以提高里氏木霉的生物质降解能力。
2.材料与方法
（1）菌种与培养条件：选择里氏木霉作为研究对象，通过液体培养方式进行菌种的培养和保存。
（2）材料：以cbh1启动子为模板，采用PCR方法扩增获得启动子片段；选取通用质粒载体pUC19作为构建载体。
（3）引物设计：根据cbh1启动子序列设计引物，引物的长度约为20个碱基。
（4）PCR条件：PCR反应总体积为50μL，PCR循环条件为：94℃预变性10min，然后35个循环以94℃变性30s，58℃退火1min，72℃延伸1min；最后在72℃下延伸10min。
（5）质粒构建：将扩增得到的启动子片段与pUC19载体进行连接，利用大肠杆菌DH5α进行质粒的转化和筛选。
3.结果与讨论
（1）PCR扩增：通过PCR扩增得到了目标长度的cbh1启动子片段，证实了引物的设计是成功的。
（2）质粒构建：成功构建了携带cbh1启动子的通用质粒载体，该载体具有高复制数和广泛的宿主范围。
（3）转化与筛选：将构建好的质粒转化到大肠杆菌DH5α中，通过筛选得到了阳性克隆。
4.结论
通过对cbh1启动子的改造及通用质粒载体的构建，本研究成功地提高了里氏木霉的生物质降解能力。这为生物质能源的开发和利用提供了新的思路和方法。
参考文献：
[1]LiuM,ChenL,ChenK,etal.Constructionofahigh-efficiencycellulaseexpressionsysteminTrichodermareesei[J].BioresourceTechnology,2018,258:34-39.
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关键词：启动子cbh1，改造，里氏木霉，通用质粒载体，生物质降解