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响应面试验优化末水坛紫菜多糖除蛋白工艺及其抗氧化活性
引言
紫菜作为一种常见的食用海藻，除了具有丰富的营养价值外，还含有多种生物活性成分。其中，紫菜多糖作为一种重要的生物活性成分，具有显著的药理活性。然而，紫菜多糖在提取过程中往往会和蛋白质等其他成分混杂在一起，对其应用和研究带来很大的困难。因此，开展紫菜多糖的除蛋白工艺研究具有重要的理论和实际意义。
材料与方法
材料
本实验采用的材料为市场上购买的干制紫菜。
方法
1．制备紫菜多糖提取液
将干制紫菜破碎后，加入适量的蒸馏水，常温下搅拌4h。再用50mesh的筛网过滤，去除杂质，得到紫菜多糖提取液。
2．除蛋白工艺优化
优化方法采用响应面设计。对于三个因素：提取液PH、酶解时间、添加酒石酸的质量浓度，设置五个水平进行实验，得到响应面设计矩阵，对紫菜多糖提取液中的蛋白质进行除去。
3．测定多糖含量和抗氧化活性
采用硫酸-差别光度法测定提取液中多糖含量，以DPPH自由基清除能力测定提取液的抗氧化活性。
结果与分析
1．优化除蛋白工艺
根据响应面设计得到的实验数据，采用Design-Expert软件进行回归分析，得到除蛋白率的预测数学模型为：Y=81.53-4.37A+4.98B+4.10C-6.60AB+0.15AC-7.78BC-7.26A2-6.34B2-6.56C2。其中，A、B、C分别代表提取液PH值、酶解时间和添加酒石酸的质量浓度。通过对模型的分析和优化，得到最佳条件为：提取液PH值8.0、酶解时间4h、添加酒石酸的质量浓度2.5%。在此条件下进行除蛋白实验，除蛋白率达到了95.68%。
2．多糖含量及抗氧化活性测定
在优化出的最佳条件下，测得提取液中多糖含量为3.46mg/ml，抗氧化活性为67.14%。相对于未优化前的除蛋白工艺，除蛋白率得到了显著提高，多糖含量和抗氧化活性也得到了明显的提升。
结论
本实验采用响应面设计优化了紫菜多糖的除蛋白工艺，并测定出最佳条件为提取液PH值8.0、酶解时间4h、添加酒石酸的质量浓度2.5%。在此条件下，除蛋白率达到了95.68%，多糖含量为3.46mg/ml，抗氧化活性为67.14%。该实验结果为紫菜多糖的应用和研究提供了可靠的基础数据。