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HPLC法测定桔梗不同部位、不同产地药材中桔梗皂苷D含量
石俊英，王颖，巩丽丽，任霜亭
[摘要]目的：采用反相高效液相法测定桔梗不同部位、不同产地药材中桔梗皂苷D含量。方法：采用PhenomenexC18色谱柱，流动相比例为CH3CN：H2O：2%H3PO4=28：57：15，流速为1.0ml/min，检测波长210nm，柱温25℃。结果：山东淄博GAP基地桔梗药材中桔梗皂苷D含量最高，质量最佳；不同部位中韧皮部及根上部含量最高。结论：该方法准确、可行，可以作为测定桔梗皂苷D的定量方法。
[关键词]桔梗；HPLC；桔梗皂苷D；含量
桔梗来源于桔梗科植物桔梗PlatycodongrandiflorumJacq.A.DC.的干燥根。桔梗药材中含有皂苷类、多糖、脂肪酸、氨基酸等多种成分，其中皂苷类是主要的药理活性成分。桔梗皂苷的种类非常多，包括桔梗皂苷A-L以及远志苷D、D2等。我们曾研究了不同产地桔梗中总皂苷成分与质量的相关性[1]。许传莲等采用RP-HPLC法测定了不同产地桔梗中皂苷D的含量，选择C18柱为色谱分析柱，检测波长为210nm[2]。朱丹妮等采用HPLC-ELSD法，以乙腈水(V/V)=28：72为流动相，ELSD-500为检测器，进行了外标法定量[3]。目前对于桔梗皂苷D的测定方法研究较少，本文期望通过实验研究，探讨桔梗药材不同部位中桔梗皂苷D的分布规律，不同产地桔梗药材中桔梗皂苷D的含量，为进一步制定桔梗的含量测定方法和质量评价指标提供科学依据。
1仪器及材料
1.1仪器
AGILENT1100LC高效液相色谱仪(美国)；AGILENTCHEMSTATION工作站(美国安捷伦科技公司)；检测器：AGILENTDAD；色谱柱：Phenomenex-C18柱(250×4.6mm，粒度5µm；迪马公司)。
1.2试验材料

2方法与结果
2.1对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的桔梗皂苷D对照品，加甲醇溶解，配成0.4mg/ml，作为对照品溶液。
2.2供试品溶液的制备
精密称取本品粉末4g，以甲醇25ml超声提取30min，过滤，回收甲醇，浸膏加水以乙醚脱脂，水液以水饱和的正丁醇提取，提取液蒸干，以甲醇定容至10ml。
2.3测定方法
色谱柱：Phenomenex-C18柱(250×4.6mm，5µm)；柱温：25℃；流动相：乙腈：水：2%磷酸(28：57：15)；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm。设定HPLC色谱仪的测定参数：在线脱气，自动进样，每次10µl流速1.0ml/min，柱温25℃，记录25min的色谱图。在供试品色谱中，以相对保留时间和峰面积为参照，对比分析图谱，进行鉴别。
2.4方法学考察
2.4.1标准曲线的绘制分别精密吸取对照品溶液2，5，10，15，20，25，30µl进样，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：桔梗皂苷DY=85.79x+4.8975，r=0.9995，参见图2。

表2精密度试验结果
对照品编号12345RSD(%)峰面积354.8828354.3709353.2275351.2946353.71720.39

2.4.2精密度试验取同一对照品溶液10µl连续进样5次，测其峰面积，计算RSD。结果见表2。
2.4.3稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24，48h测定峰面积，计算RSD，结果见表3。

2.4.4重复性试验取桔梗药材供试品5份，按样品测定法测定，计算RSD。结果见表4。

2..4.5回收率试验采用标准加入法，精密称取已测知含量的样品5份，分别加入一定量的对照品溶液，按样品测定项下方法操作，计算回收率，结果见表5。

表6桔梗不同部位所含桔梗皂苷D的含量比较（n=3）
样品编号产地加工方法采收地点桔梗皂苷D含量%12桔梗木质部山东淄博0.2613桔梗韧皮部山东淄博0.4414桔梗栓皮山东淄博0.0315桔梗芦头山东淄博0.2616桔梗根上端山东淄博0.4117桔梗根中端山东淄博0.3618桔梗根下端山东淄博0.34

表7不同产地桔梗中桔梗皂苷D的含量比较（n=3）
样品编号产地加工方法采收地点桔梗皂苷D含量%1去皮桔梗山东淄博0.392去皮桔梗山东泗水0.203去皮桔梗山东临朐0.184去皮桔梗山东青岛0.365去皮桔梗安徽亳州0.146去皮桔梗河北安国0.267去皮桔梗陕西丹凤0.388去皮桔梗黑龙江饶河0.189去皮桔梗贵州贵阳0.3410去皮桔梗河南桐柏0.3311去皮桔梗河南周口0.32
2.5样品测定
按供试品溶液制备项下方法制备样品溶液，用0.45µm滤膜过滤后，进样10µl，按上述色谱条件测定。
2.6结果
桔梗不同部位的成分比较见表6。桔梗皂苷D的含