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实验一显微镜的构造及使用方法
一、目的要求
了解显微镜的构造、性能及成像原理。
掌握显微镜的正确适用及维护方法。
二、实验器材
显微镜、纱布、绸布
酵母菌示教标本
三、普通光学显微镜简介
微生物的最显著的特点就是个体微小，必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构。熟悉显微镜并掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。
显微镜可分为电子显微镜和光学显微镜两大类。光学显微镜包括：明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、立体显微镜等。其中明视野显微镜为最常用普通光学显微镜，其它显微镜都是在此基础上发展而来的，基本结构相同，只是在某些部分作了一些改变。明视野显微镜简称显微镜。
（一）显微镜的构造
普通光学显微镜的构造可以分为机械和光学系统两大部分。

图1-1显微镜构造
1.目镜2.镜筒3.转换器4.物镜5.载物台6.聚光器7.虹彩光圈
8.聚光镜调节钮9.反光镜10.底座11.镜臂12.标本片移动钮
13.细调焦旋钮14.粗调焦旋钮15.电源开关16.光亮调节钮17.光源
机械系统：
镜座Base：在显微镜的底部，呈马蹄形、长方形、三角形等。
镜臂Arm：连接镜座和镜筒之间的部分，呈圆弧形，作为移动显微镜时的握持部分。
镜筒Tube：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。镜筒的上端可插入接目镜，下面可与转换器相连接。镜筒的长度一般为160mm。显微镜分为直筒式和斜筒式；有单筒式的，也有双筒式的。
旋转器Nosepiece：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。有3~4个孔，用于安装不同放大倍数的接物镜。
载物台Stage：是支持被检标本的平台，呈方形或圆形。中央有孔可透过光线，台上有用来固定标本的夹子和标本移动器。
调焦旋钮：包括粗调焦钮Coarseadjustmentknob和细调焦钮Fineadjustmentknob，是调节载物台或镜筒上下移动的装置。
2. 光学系统
接物镜Objectivelens，常称为镜头，简称物镜，是显微镜中最重要的部分，由许多块透镜组成。其作用是将标本上的待检物进行放大，形成一个倒立的实像，一般显微镜有3~4和物镜，根据使用方法的差异可分为干燥系和油浸系两组。干燥系物镜包括低倍物镜（4~10x）和高倍物镜（40~45x），使用时物镜与标本之间的介质是空气；油浸系物镜（90~100x）在使用时，物镜与标本之间加有一种折射率与玻璃折射率几乎相等的油类物质（香柏油）作为介质。
图1-2物镜的各种标记

1——放大倍数
2——数值口径
3——镜筒长度要求
4——指定盖玻片厚度

接目镜Eyepiecelens：通常称为目镜，一般由2~3块透镜组成。其作用将由物镜所形成的实像进一步放大，并形成虚像而印入眼帘。一般显微镜的标准目镜是10x。
聚光镜Condenser：位于载物台的下方，由两个或几个透镜组成，其作用是将由光源来的光线聚成一个锥形光拄。聚光镜可以通过位于载物台下方的聚光镜调节旋钮进行上下调节，以求得最适光度。聚光器还俯有虹彩光圈（IrisdiapHragm）,此调节锥形光拄的角度和大小，以控制进入物镜的光的量。
反光镜：反光镜是一个双面镜，一面是平面，另一面是凹面，起着把外来光线变成平行光线进入聚光镜的作用。使用内光源的显微镜就无需反光镜。
光源：日光和灯光均可，以日光较好，其光色和光强都比较容易控制，有的显微镜采用装在底座内的内光源。
（二）显微镜的成像原理
显微镜的放大作用是由物镜和目镜共同完成的。标本经物镜放大后，在目镜的焦平面上形成一个倒立实像，再经目镜进一步放大形成一个虚像，被人眼所观察到（图1-3）。
在油镜系中，载玻片与镜头之间多用香柏油作介质。因香柏油的折射率（n=1.51）与玻璃的折射率（n=1.52）几乎相等，故透过载玻片的光线通过香柏油后，直接进入物镜，而不发生折射。两组物镜光线通路的区别如图1-4所示

图1-3显微镜成像原理图1-4物镜光线通路
（三）显微镜的性能
1.分辨率和数值口径
衡量显微镜性能好坏的指标主要是显微镜的分辨率，显微镜的分辨率（Resolvingpower）是指显微镜将样品上相互接近的两点清晰分辨出来的能力。它主要取决于物镜的分辨能力，物镜的分辨力是所用光的波长和物镜数值口径的函数。分辨率用镜头所能分辨出的两点间的最小距离表示，距离越小，分辨能力越好。可用公式表示：

物镜的数值口径（Numbericalaperture），简写为（N.A）：表示从聚光镜发出的锥形光柱照射在观察标本上，能被物镜所聚集的量。可用公式表示：

n——标本和物镜之间介质的折射率
θ——由光源投射到透镜上的光线和光轴之间的最大夹角
光线投射到物镜的角度越大，数值口径就越大。如果采用一些高折射率的物质作介质，如使用油镜时采用香柏油