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【实验目的】【实验原理】普通光学显微镜成像原理图显微镜的分类 现代显微镜可以分为两大类:一类是光学显微镜,另一类是非光学显微镜。这两类显微镜又可根据不同的情况分成若干类型。普通光学显微镜的基本结构普通光学显微镜基本构造显微镜的光路1.取镜和安放 置显微镜于平稳的实验台上,镜座距实验台边沿约为3~4cm。镜检者姿势要端正。 (取、放显微镜时应一手握住镜臂,一手托住底座,使显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提;且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察,以减少眼睛疲劳,也便于边观察边绘图或纪录。)2.低倍镜的操作 置显微镜于固定的桌上,接通电源,打开光源。 将标本片放在载物台上,用标本夹夹住,调节推动器,使观察的目的物处于物镜的正下方。 调节粗调螺旋,使物镜(10×)与标本靠近,眼睛在侧向注视物镜,防止物镜和载玻片相碰。 张开双眼向物镜里观察,如果见到目的物,但不十分清楚,可用细准焦螺旋,至目的物清晰为止。 通过玻片夹推进器慢慢移动玻片,认真观察标本各部分,找到合适的目的物,仔细观察并记录所观察到的结果。3.高倍镜的操作 使用高倍镜前,必须先用低倍镜观察,发现目的物后将它移至视野正中处。 旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动,这说明原来低倍镜并没有调准,目的物并没有真正找到,必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊,调节细准焦螺旋,直到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系,防止镜头与载玻片强力接触,损坏镜头或载玻片。4.油镜的操作 如果用高倍镜目的物未能看清,可用油镜。先用低倍镜和高倍镜检查标本片,将目的物移到视野正中。 在载玻片上滴一滴香柏油,将油镜移至正中,缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸没在油中,刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋微微向上调(切忌不用粗准焦螺旋)即可。 油镜观察完毕,用油镜纸将镜头上的油揩净,另用擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头,再用擦镜纸揩干。 (应特别注意不要在下降镜头时用力过猛,或者调焦时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片)5.换片 观察完一个标本后,如果想要再观察另一标本时,需先将高倍物镜(或油镜)转回到低倍物镜,取出标本,按放片的方法换上新片,即可观察。千万不可在高倍物镜(或油镜)下换片,以防损坏镜头。 6显微镜使用后的整理 观察结束后,调节光源到最小再关掉电源开关。调节粗调螺旋,使载物台下降到最低,取下玻片,擦干净镜体,罩上防尘罩,然后放回原处。 显微镜的保养及注意事项(4)使显微镜的各部件恢复回原位,下降镜筒,使物镜呈“八”字形置于载物台上,然后将显微镜送回镜箱中。 (5)显微镜应存放在干燥阴凉的地方,不要放在强烈的日光下暴晒,霉雨季节应在显微镜箱内放置干燥剂(硅胶),如长时间不用,则光学部分应卸下放在干燥器中,以免受潮生霉。 (6)显微镜应严禁与挥发性药品或腐蚀性药品放在一起,如碘片、盐酸、硫酸等药品。操作练习向培养物中加入适量的秋水仙素,使纺锤体微管解聚,这样细胞停留在中期,可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液(一般是0.075mol/L的KCl)处理,使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去,最后以气干法制片,可获得较好的染色体标本。 核仁组织区(NOR)就是染色体上编码5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA的基因(rDNA)所在的部位。染色质上具有转录活性或已转录过的rRNA基因部位伴有丰富的酸性蛋白,含有SH基团和二硫键,可将AgNO3中的Ag+还原成黑色的Ag颗粒,银染强度与rRNA的转录活性有关。G-显带:Giemsa染料使染色体的不同区段出现亮暗相间带纹。DNA上含高比例二硫键的氧化态蛋白质区域,经过一系列处理后显示暗带,而另一些含巯基的还原态蛋白质区域,为亲水性蛋白质,对染料的亲和力低,所以不易显色,为明带区。人类染色体人类染色体染色体带型图谱secondaryconstriction(次缢痕):染色体上除主缢痕外的缢缩部位。 Nucleolarorganizingregion(NOR,核仁组织区):细胞核特定染色体的次缢痕处,含有rRNA基因的一段染色体区域,与核仁的形成有关。 satellite(随体):位于染色体末端、圆形或圆柱形的染色体片段,通过次缢痕与染色体的主要部分相连。Telomere(端粒)实验报告格式显微结构图的绘制【作业】(3)画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓,再依照轮廓一笔画出与物象相符的线条。线条要清晰,比例要准确。较长的线条要向顺手的方向运笔,或把纸转动再画。同一线条粗细相同,中间不要有断线或开叉痕迹,线条也不要涂抹。 (4)绘出的图要正确,观察时要把混杂物、破损、重叠等现象区别清楚,不要把这些现象绘上。 (5)图的明暗及浓淡,应用细点表示,不要采用涂抹方法。点细点时,要