动物基因组DNA、总RNA测定.ppt

动物基因组DNA、总RNA
的提取及含量测定目的要求理论基础核酸分离、纯化原则注意：1、RNA的提取与测定工业提取RNA的方法浓盐法：使用10％氯化钠的溶液，同时在90摄氏度热提取3-4小时，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。经冷却，离心后上清液由乙醇沉淀RNA。

稀碱法：使用0.2％氢氧化钠裂解酵母，然后用酸中和，除去蛋白和菌体，上清液由乙醇沉淀RNA，或调等电点PI2.5沉淀。原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。
方法：先用组织捣碎机将动物肝脏制成组织匀浆，再用0.14mol/L氯化钠溶液把细胞中的RNP提取出来，最后用酚将RNA和蛋白质分开。RNA提取RNA含量测定方法将样品配制成含5~50μg/mL核酸的溶液，于紫外分光光度计上测定260nm吸收值，计算核酸浓度：
RNA浓度（μg/mL）=
式中：O.D260为260nm波长处吸收值；L为比色杯的厚度；0.024为每毫升溶液内含1微克RNA的光吸收值；
在酸性环境中，定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中的磷酸反应生成磷钼酸，当有还原剂存在时磷钼酸立即转变蓝色的还原产物―钼蓝。
H3PO4+12H2MoO4→H3P(Mo3O10)4+12H2O
↓还原剂
钼蓝
钼蓝最大的光吸收在650-660nm波长处。当使用抗坏血酸为还原剂时，测定的最适范围为1-10微克磷。RNA含量测定试剂和器材思考题

RNA提取方法有几种？有什么优缺点？
RNA提取过程中应注意什么？
DNA的提取及含量测定去除蛋白的常用方法DNA的提取DNA含量测定方法DNA含量测定管号
试剂(mL)试剂和器材思考题工艺图