发酵液溶磷含量测定.docx

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发酵液溶磷含量测定SOP

目的：
制订发酵液溶磷含量测定标准操作规程，确保发酵液中溶磷含量检测的准确。
适用范围：
适用于公司发酵液溶磷含量的检验。
责任者：
质量检验部QC操作人员
四、内容：
1、原理：
正磷酸盐在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，再用抗坏血酸使之还原成低价的钼蓝，此蓝色溶液符合比尔定律。
2、仪器：电子分析天平分光光度计恒温水浴埚容量瓶刻度吸管
3、磷标准溶液配置
取一定量KH2PO4(A.R)置于称量瓶内，在105℃干燥至恒重，精密称取0.439克，加水溶解，加入1mL硫酸，于100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即得1mg/mL磷标准溶液。有效期10天。
准确吸取上述磷标准溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得10ug/mL磷标准溶液。此标准溶液现配现用。
4、定磷试剂配制：
将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比1∶2∶1∶1的比例混匀即得。现配现用。
5、绘制磷标准曲线
取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45℃水浴20分钟，冷却至室温，按照《分光光度计校准使用SOP》在660nm波长下测量其OD值。以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。
管号012345610ug/mL磷标准溶液（mL）00.51.01.52.02.53.0溶液磷含量（ug）051015202530水（mL）3.02.52.01.51.00.50定磷试剂（mL）3.03.03.03.03.03.03.0线性回归系数≥0.999
6、样品磷含量检测
取发酵液离心后上清液0.1mL，至试管中，加2.9mL水，再加入定磷试剂3mL，振摇，于45℃水浴20分钟，冷却至室温，以空白做对照，按照《分光光度计校准使用SOP》于660波长测OD值。
5计算：
根据磷标准曲线以及稀释倍数计算磷含量(ug/mL)。
五、文件发放范围
公司生物产业部质量管理部1份，质量检验部2份，产业部相关领导每人1份，存档2份。
六、变更记录：
上版文件编号上版文件实施日期本次变更原因、依据及详细变更内容SL-QAD-248-00采用新版格式和编号，增加文件修订内容SLB-QC-010-01增加了定磷试剂的配制、标定方法、标定记
录，规定了定磷试剂的有效期

磷标准曲线绘制记录
批号：编号：SLB-QC-010-02R1
磷标准溶液配制：（天平编号：）
精密称取0.439克于105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾，加水溶解，加入1mL硫酸，
于100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即得1mg/mL磷标准溶液。有效期10天。
配制人：配制日期：年月日
准确吸取上述磷标准溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得10ug/mL磷标准溶液。现配现用。
配制人：配制日期：年月日定磷试剂配制：将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比1∶2∶1∶1的比例混匀即得。现配现用。
试剂取用数量:
3mol/L硫酸水2.5%钼酸铵10%抗坏血酸
配制人：配制日期：年月日磷标准曲线的绘制：（分光光度计编号：）取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45℃水浴20分钟，冷却至室
温，于660nm波长处分别测溶液OD值。以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。
管号012345610ug/mL磷标准溶液（mL）00.51.01.52.02.53.0水（mL）3.02.52.01.51.00.50定磷试剂（mL）3.03.03.03.03.03.03.0测得溶液OD值为：
管号0123456溶液磷含量（ug）051015202530OD值线性回归方程（磷标准曲线）为：

线性回归系数应≥0.999线性回归系数为：

符合规定□不符合规定□
标定人：标定日期：年月日复核人：日期：年月日发酵液溶磷检验记录
编号：SLB-QC-010-02R2
品名：批号：操作步骤：取发酵液离心上清液0.1mL至试管中，加2.9mL水，加定磷试剂3mL，振摇，于45℃水浴20分钟，冷却至室温，以空白做对照，按照《分光光度计校准使用SOP》于660nm波长处测溶液OD值。
根据磷标准曲线以及稀释倍数计算溶磷含量。计算：溶磷含量（ug/mL）＝
磷标准曲线：年取样
时间生长时间OD660值溶磷含量（ug/mL）检验人复核人月日