碱性蛋白酶酶解红花籽蛋白制备抗氧化肽工艺的研究.docx

碱性蛋白酶酶解红花籽蛋白制备抗氧化肽工艺的研究
摘要：
本研究采用碱性蛋白酶酶解红花籽蛋白，制备抗氧化肽。实验条件为酶反应温度50℃，pH值8.5，酶底物比1:20，酶解时间6h。通过SDS-PAGE分析，发现酶解后得到的红花籽蛋白质量明显降低，产生了较多小分子肽段。同时，采用DPPH、ABTS、OH自由基清除能力测定表明，酶解液在较高浓度下表现出了较强的抗氧化能力。因此，通过这种方法制备的抗氧化肽，可以应用于食品、化妆品等领域。
关键词：碱性蛋白酶；红花籽蛋白；抗氧化肽；酶解；SDS-PAGE；DPPH；ABTS；OH自由基
引言：
随着人们对健康的关注不断加强，食品中添加抗氧化剂的需求越来越高，抗氧化肽被广泛应用于食品、化妆品等领域。目前，抗氧化肽主要来自于动物源和植物源蛋白，如鱼肉、大豆蛋白、黄豆蛋白等。但是，植物蛋白中抗氧化肽的含量较低，如何从植物蛋白中制备高效的抗氧化肽成为研究的热点。
红花籽是一种富含植物蛋白的食品原料，其中富含一系列天然氨基酸，有助于抗氧化和减轻炎症反应。因此，红花籽成为了制备抗氧化肽的优秀来源之一。而酶解是制备抗氧化肽的关键工艺之一，酶解液的成分和酶解条件的优化对制备高效抗氧化肽至关重要。
本研究旨在采用碱性蛋白酶酶解红花籽蛋白，制备高效抗氧化肽。通过一系列实验，优化酶解液的成分和条件，并对酶解液进行DPPH、ABTS、OH自由基清除能力测定，评价抗氧化肽的效果。
实验方法：
材料：
红花籽蛋白（样品来源于自行购买的红花籽加工品）、碱性蛋白酶
DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基
试剂：
蒸馏水、甘油、乙酸钠、氯化钠、NaOH、Tris-HCl、酒精、明胶、硫酸铵
装置：
酶解装置、电泳装置、紫外检测器、超声波清洗仪、低速离心机等实验装置。
实验步骤：
1.红花籽蛋白酶解反应
将酶解装置中的红花籽蛋白加入适量的Tris-HCl缓冲液，pH值调节至8.5，加入碱性蛋白酶，并保持反应温度在50℃恒温6h，酶底物比为1:20。
2.离心
将反应液离心10min，温度为4℃。
3.电泳分析
将反应液与标准蛋白进行SDS-PAGE电泳分析，将分析得到的片段进行染色并观察。
4.抗氧化能力测定
采用DPPH、ABTS、OH自由基清除能力测定法对酶解液进行测定，评价抗氧化能力。
结果分析：
经过SDS-PAGE分析，可以看到酶解后，红花籽蛋白的分子量明显降低，同时产生了较多的小肽段，说明酶解液已经有效的将红花籽蛋白分解。
同时，通过DPPH、ABTS、OH自由基清除能力测定，可以看到酶解液在较高浓度下表现出了较强的抗氧化能力，这表明通过碱性蛋白酶酶解的红花籽蛋白制备出来的抗氧化肽已经具有较好的效果。
结果表明，碱性蛋白酶酶解红花籽蛋白制备抗氧化肽具有一定的可行性，进一步探究制备抗氧化肽的酶解工艺将是值得研究的方向。