环境工程微生物学实验顾彦.pptx

环境工程微生物学实验顾彦试验一微生物细胞计数目标要求试验原理血球计数板结构血球计数板计算方法计数公式试验器材操作步骤结果统计思索题试验二培养基配制和灭菌试验目标试验原理试验器材试验步骤二、培养基配制3.调pH值：用10％NaOH调pH至7.2~7.4，用精密pH试纸对照。
4.过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果观察。不过供普通使用培养基，该步可省略。
5.分装：将培养基分装于5支试管，其余全部倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染(见图2－3)。分装量：固体培养基约为试管高度1／5，灭菌后制成斜面（图2－4）。分装入锥形瓶内以不超出其容积3/5为宜。半固体培养基以试管高度1/3为宜．灭菌后垂直待凝。注意不要污染棉塞和瓶口。
6.包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。
7.灭菌备用：灭菌条件：1210C（相当蒸汽压力0.103MPa）培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
图例三、稀释水制备四、灭菌湿热灭菌：高压蒸气灭菌法5.当压力达1.05kg/cm2(灭菌器内温度为121℃)即开始灭菌，使其维持15～30min。对热不稳定培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物质时，应适当降低压力(0.56kg/cm2)，延长时间。6.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品，排出锅内剩下水。
7.待培养基冷却后置于37℃恒温箱内培养24h，若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保留备用。间歇灭菌法：过滤除菌法：不能用加热灭菌液体物质（如维生素、血清），普通可用细菌过滤器进行除菌。思索题试验三细菌纯种分离、培养和接种技术试验目标实验器材实验步骤(一)稀释平板法稀释液制备③加热培养基，当其冷至45℃左右时，右手拿装有培养基锥形瓶，左手拿培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，靠近火焰，将皿盖掀开，倒入培养基后将培养皿平放在桌上，顺时针和逆时针往返转动培养皿，使培养基和菌液充分混匀，冷凝后即成平板，倒置于30℃培养24～48h，然后观察结果。
④取对照无菌培养皿，倒平板待凝固后，打开皿盖10min后盖上，倒置于30℃培养24～48h，然后观察结果。（二）平板划线法平板划线分离划线方法
左：连续划线法（1，2依次划线起点）右：分区划线法（1，2，3，4依次划线起点）二、细菌接种技术（一）斜面接种法④将已灼烧过接种环伸入菌种试管内。先冷却，而后再用环挑取少许菌种，将接种环抽出并快速伸入待接种试管底部，在斜面上由底部向上划线。抽出接种环，塞上棉塞将试管插在试管架上，最终再次烧红接种环，则接种完成。（二）液体接种和穿刺接种（三）稀释平板涂布法（四）液体培养基中菌种接入液体培养基
接种工具：无菌移液管和无菌滴管
移液管和滴管不能在火焰上烧，应预先灭菌
用无菌移液管自菌种管中吸收一定量菌液接到另一管液体培养基中，将试管塞好棉塞即可。思索题试验四滤膜法测定总大肠菌群试验目标试验原理试验器材品红亚硫酸钠培养基（乙）乳糖蛋白胨培养基试验步骤二、过滤水样三、培养四、观察结果五、试验结果思索题试验五空气中微生物测定
了解不一样环境条件下，空气中微生物分布情况；
学习并掌握检测和计数空气微生物基础方法。灭菌培养皿、天平、称量纸、恒温箱、
培养基

(—)肉汤蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）（二）高氏一号琼脂培养基（培养放线菌）（三）查氏培养基（培养霉菌）落菌法
(1)将肉汤蛋白胨琼脂培养基、查氏琼脂培养基、高氏一号琼脂培养基溶化后，各倒十五个平板，冷凝。
（2）在一定面积房间内，按下列图5点所表示，每种培养基每个点放三个平板，打开皿盖，暴露于空气中30分钟或60分钟后盖上盖子。
（3）肉膏蛋白胨平板于37℃，倒置培养1天；查氏琼脂平板和高氏一号琼脂平板倒置于28℃培养分别培养24~48h各自计算其菌落数，观察菌落形态、颜色。（4）计算每m3空气中微生物数量。
奥梅梁斯基曾提议：面积为100cm2平板培养基，暴露在空气中5分钟相当于10升空气中细菌数。
奥氏公式：
依据落菌法，统计空气中微生物种类和相对数量，填写下表，推算出1m3空气中细菌数。
空气微生物测定结果