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环境工程微生物学实验讲义
实验一光学显微镜的使用
一、目的要求
1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。
2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。
3、学习生物图的绘制方法
二、实验内容
学习普通光学显微镜的使用方法，学会判断是否需要使用油镜，学习理解，学习怎样使用和利用光圈，反光镜，调整反差，使视野达到最好的观察效果。学习使用油镜观察微生物标本示范片。
观察的示范片有，细菌三型涂片、葡萄球菌涂片、枯草芽孢杆菌涂片、褐球固氮菌涂片、八叠球菌涂片、猪链球菌涂片，青霉、曲霉示范片等。
三、实验器材
显微镜、各种示范片、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。
四、方法步骤
1用低倍镜对（调）光，使视野明亮。
2选择要观察的标本片，首先在低倍镜观察（寻找观察目标）。
3高倍镜观察（选取理想的观察目标）。
4油镜观察：高倍镜观察后――上升镜筒（或者是下调载物台）――油镜转至正下方，在载玻片上加一小滴香柏油――小心地下降镜筒使镜头浸在油里――用粗螺旋将镜筒（载物台）缓慢上升，寻找目标（物象）――用细螺旋调节，使物象清晰――观察记录。
5观察完毕。上升镜筒（或者是下调载物台），转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。
6将显微镜各部分还原至进实验室时模样。

五结果与思考
1绘图记录观察结果（以细菌三型为例）
细菌三型涂片观察
放大倍数目×10物×100_细菌三型涂片观察
放大倍数目×10物×1002油镜完毕后，镜头应如何处理?
六、讲解时的注意事项：
1、本次实验为学生第一次进入微生物实验室，因此在开始实验时必须向学生交代实验室的一些规章制度及注意事项。
2、对显微镜的介绍从原理到各部件到使用都务必详细，包括使用过程中应该注意的事项，尽量减少学生用坏仪器的几率。
3、一定要详细讲解观察时视野内的反差调节，提高学生的实验效率。
4、要提醒学生要掌握正确的观察方法，左眼观测，右眼用于画图或记录。养成良好的观察习惯。
5、要要求学生实验报告绘图时必须采用铅笔。
6、要强调油镜护理的重要性。
实验二藻类、原生动物及微型后生动物个体形态的观察
（水处理中常见微生物的观察或活性污泥的观察）
一、目的要求
1进一步熟悉和掌握普通光学显微镜的使用方法。
2掌握生物图的绘制方法。
3学习压滴法制作标本片。
二实验内容
用显微镜观察活性污泥。
三实验器材
1、实验室提供的水样：活性污泥混合液、生物滤池水样、SBR反应器水样、生物接触氧化池水样
2、学生自取水样（让学生来实验室之前自选地点取样，记录采样地点）
3、显微镜、吸水纸、擦镜纸。
四方法步骤
1、用压滴法制作藻类、原生动物和微型后生动物的标本片。
2、低倍镜观察（寻找观察目标）。
3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。
4、绘制藻类、原生动物和微型后生动物的形态图。
五结果与思考
1绘图记录观察结果
藻类观察
放大倍数原生动物观察微型后生动物观察
放大倍数放大倍数
2你观察到几种微生物？来自不同水样观察到的结果是否不同
六、讲解时的注意事项：
1、要再一次强调显微镜的正确使用方法。
2、再一次强调反差的作用。
3、示范压滴法制作生物标本片的过程
4、结合课堂内容，让学生明白使用显微镜观测活性污泥的意义，鼓励学生多做示范片，多认识几种原生动物等。
5、再一次强调正确的观察方法。
6、再次提醒学生注意使用铅笔绘图。
7、提及PFU生物监测法，告诉学生此为开放实验，有兴趣的学生可以选择在实验结束选做。
实验三、四微生物细胞计数和大小的测量
一目的要求
1学习掌握血球计数板进行微生物计数的方法。
2学习掌握用测微尺测量微生物细胞大小的方法。
二实验内容
1用血球计数板计算酵母菌悬液中，每毫升原液的菌数。
2用测微尺测量生物示范片中微生物的大小。
三实验器材
1菌种：酿酒酵母。
2仪器及其它：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸、各种生物示范片。
四方法步骤
（一）微生物显微镜直接计数法
1制备酵母菌的菌悬液。
2取血球计数板一块，先用眼睛观察其结构，然后在低倍镜下观察计数室的网格结构。
3将盖玻片放在计数器的网格上方使之架起。
4用滴管吸取少许摇匀的酵母菌悬液，从盖玻片的一端注入，使酵母菌悬液渗入两玻片之间（应无气泡，盖玻片不顶浮）。
5将计数板水平静置5分钟使菌液分布均匀后计数，。
6用低倍镜寻找计数器的网格，然后在高倍镜下按下述原则对上下两个计数室内的酵母菌进行计数。
即：采用五点取样法（25×16）或四点计样法（16×25）各计上不计下、计左下计右的原则计数五个或四个中格中的酵母菌数。
7计算原菌液中含酵母菌数
每ml原液中含酵母菌数=两次计数