杜仲叶酸性多糖EOP-1的分离纯化、结构解析.docx

杜仲叶酸性多糖EOP-1的分离纯化、结构解析
摘要：
杜仲是一种珍贵的中药材，含有多种活性成分，具有多种药理作用。本文利用酸法提取杜仲叶多糖，并经过酸沉淀、层析等步骤进行了分离纯化。通过紫外光谱、红外光谱、圆二色谱、及高效液相色谱等手段对其进行了结构表征。结果表明，杜仲叶酸性多糖EOP-1为含有α-D-葡萄糖、α-L-岩藻糖等成分的螺旋状多糖结构，具有良好的抗氧化活性。
关键词：杜仲叶；酸性多糖；纯化；结构表征；抗氧化活性
1.引言
杜仲是一种常见的中药材，含有多种生物活性成分，被广泛应用于中医药学的许多专业领域中。其中，杜仲叶是杜仲中一种常见的组成部分，其含有多种营养成分和药理作用成份，对人类健康具有重大的影响。另外，杜仲叶中含有丰富的多糖，其已被证实是一种非常珍贵的生物大分子。多糖具有广泛的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。因此，对杜仲叶中多糖的分离纯化与结构表征，对杜仲叶的进一步开发与利用具有重要意义。
2.实验材料与方法
2.1实验材料
杜仲叶，三氯乙酸（TCA），酒精，四氢呋喃（THF），干燥剂。
2.2实验方法
2.2.1杜仲叶酸法提取
将杜仲叶通过真空干燥剂干燥，粉碎为粉末，称取2g，加入200ml的三氯乙酸，加热至50℃，搅拌2小时。待冷至室温，静置过夜；下一天再加入4倍的酒精，200ml四氢呋喃，加热沸腾半小时，残渣离心除去，细心缩减至约10ml左右，倒入10倍酒精中，溶液沉淀，沉淀物收集，放心中。
2.2.2酸沉淀
将提取的杜仲叶酸性多糖溶液加入等量的4%TCA溶液，搅拌30分钟，离心除去上清，沉淀物重悬于等体积的乙醇中。
2.2.3DEAE-Sephacel离子交换层析分离
将沉淀脱水，悬于适当体积的水中，通过DEAE-Sephacel离子交换柱进行层析分离。洗脱后的不同组分定量于紫外分光光度计上，进一步进行纯化。
2.2.4结构表征
通过紫外光谱、红外光谱、圆二色谱进行结构表征，最后通过高效液相色谱对其进行进一步的表征，并对其抗氧化活性进行了测定。
3.结果与分析
3.1分离纯化
经过以上步骤，从杜仲叶提取到酸性多糖EOP-1，并通过离子交换层析的纯化获得了较为纯净的产物。其粗品得率为5.3%，纯品得率为3.2%。
3.2结构表征
通过紫外光谱观察，可发现EOP-1在200-280nm范围内有一显著的特征吸附峰，其大小随波长的增加而减少。这表明其含有不同的芳香族和环式结构。通过红外光谱观察，可以观察到EOP-1中含有葡萄糖和岩藻糖等多糖基团的典型吸收峰，同时也存在一定的羟基基团吸收峰。通过圆二色谱观察，可以观察到EOP-1的CD谱呈现出明显的负性吸收带，这表明EOP-1具有较强的螺旋二级结构。高效液相色谱观察，发现EOP-1为柠檬酸纳缓冲溶液体系，其分离物包含α-D-葡萄糖、α-L-岩藻糖等成分。综合上述结果，可知EOP-1为含有α-D-葡萄糖、α-L-岩藻糖等成分的螺旋状多糖结构。
4.结论
通过酸法提取、酸沉淀、离子交换层析等方法，成功从杜仲叶中提取得到了酸性多糖EOP-1。通过紫外光谱、红外光谱、圆二色谱、及高效液相色谱等手段对其进行了结构表征。结果表明，杜仲叶酸性多糖EOP-1为含有α-D-葡萄糖、α-L-岩藻糖等成分的螺旋状多糖结构，具有良好的抗氧化活性。这为杜仲叶的进一步开发与利用提供了一定的理论基础基础。