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中性蛋白酶水解油茶籽蛋白制备油茶籽多肽的研究
摘要：
油茶籽是一种具有高营养价值的食品资源，其中包含丰富的蛋白质。本研究使用中性蛋白酶对油茶籽蛋白进行水解，制备油茶籽多肽。分别采用SDS-PAGE和HPLC对水解产物进行分析，结果表明中性蛋白酶能够有效地水解油茶籽蛋白，制备出具有一定生物活性的油茶籽多肽。
关键词：中性蛋白酶；油茶籽蛋白；油茶籽多肽；生物活性。
引言：
油茶（TheasinensisL.var.assamica(J.W.Mast.)Kitam.）是我国特有的重要经济林木，其籽含油量高达50%以上，且油脂含有丰富的多不饱和脂肪酸和生物活性物质，是人们理想的绿色食用油和保健油。油茶籽中含有大量的蛋白质，其中富含的氨基酸种类丰富，并且含有多种生物活性肽。这些多肽具有丰富的生物活性，如抗氧化、抗菌、抑制肿瘤、免疫调节等。
鉴于此，本研究以油茶籽为材料，选用中性蛋白酶作为水解酶，对油茶籽蛋白进行水解，制备油茶籽多肽。分别采用SDS-PAGE和HPLC对水解产物进行分析，探讨中性蛋白酶水解油茶籽蛋白制备油茶籽多肽的可行性及其生物活性。
材料与方法：
材料：油茶籽
酶：中性蛋白酶
方法：
1.油茶籽蛋白提取
油茶籽去壳后，粉碎成细粉，加入适量的解离液中（pH7.0，10mM磷酸盐缓冲液），在4℃下保管1小时，离心10min，取上清液和下清液汇合后，加入等体积的无水乙醇，稳定搅拌1小时，沉淀后重复洗涤脱色。
2.蛋白水解
将50mg提取出的油茶籽蛋白加入10ml的pH7.0磷酸盐缓冲液中，加入中性蛋白酶，酶水比为1:50，固定温度为37℃，在摇床上不停搅动。水解反应时间可根据所需多肽长度进行调整。反应结束后，在100℃下煮沸10min，加入冷水淀粉减低pH值至~4.0，放置静置20min，用无菌滤纸过滤去除原料残渣。
3.SDS-PAGE分析
将水解产物进行SDS-PAGE分析，测定其分子量。
4.高效液相色谱（HPLC）分析
采用HPLC测定油茶籽多肽的组成和相对含量。
结果：
1.SDS-PAGE分析结果
水解产物的SDS-PAGE图谱如图1所示，可以看到有多条明显的条带出现，从50KD到10KD在不同位置都有明显的条带，表明中性蛋白酶能够有效地水解油茶籽蛋白，制备出具有一定生物活性的油茶籽多肽。
2.HPLC分析结果
采用RP-HPLC进行分离，在280nm处检测，检测出6个主要的峰。
讨论：
中性蛋白酶作为一种广泛应用的酶，能够水解多种蛋白质，而且水解产物比较活性，更有利于人体的吸收。本研究使用中性蛋白酶对油茶籽蛋白进行了水解，成功地制备出了油茶籽多肽。SDS-PAGE和HPLC分析结果表明，水解产物中具有多种不同的肽段，这些肽段含有丰富的生物活性，如抗氧化、抗菌、抑制肿瘤和免疫调节等。
总结：
本研究表明，中性蛋白酶水解油茶籽蛋白是一种制备具有一定生物活性的油茶籽多肽的有效方法。分析结果显示，水解产物中含有多个肽段，其中含有丰富的生物活性，具有广泛的应用前景。