体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的研究.docx

体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的研究
【摘要】目的建立人破骨样细胞体外培养的方法，探讨1α,25(OH)2D3、巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)、前列腺素E2(PGE2)等骨吸收刺激因子对破骨细胞分化、增殖和功能的影响，为进一步研究正畸牙齿移动的生物力学机制奠定基础。方法将脐血单核细胞接种于预置盖玻片和骨片的24孔培养板中，实验组分别加入诱导因子1α，25(OH)2D3、MCSF、PGE2，对照组不加，每3d换液一次，培养7d。采用倒置相差显微镜、TRAP染色等方法观察破骨样细胞的形成情况。结果第3天实验组单核细胞出现融合趋势，第7天TRAP染色可见阳性的多核破骨样细胞，但尚未形成骨吸收陷窝，以1α,25(OH)2D3组破骨样细胞形成数量最多。结论脐血单核细胞经1α,25(OH)2D3、MCSF、PGE2体外诱导培养后可分化为TRAP(+)多核的破骨样细胞，且10-8mol/L的1α，25(OH)2D3具有最强的生物学效应。【关键词】脐血单核细胞；破骨样细胞；细胞培养；1α,25(OH)2D3；MCSF；PGE2DifferentiationofosteoclastlikecellsinducedfromumbilicalcordbloodcellsinvitroABSTRACT:ObjectiveToestablishastableandusefulmethodforculturinghumanosteoclastlikecellsinvitro,andinvestigatetheeffectof1α,25(OH)2D3,MCSFandPGE2onosteoclastsdifferentiation,proliferationandactivationsoastolaythefoundationforfurtherstudyofthebiologicalmechanismfortoothmovement.MethodsTheHCMNCwereisolatedandculturedin24wellplatewithcoverslipsandhumandentineslices.Theexperimentgroupwasculturedwith1α,25(OH)2D3,MCSFandPGE2,respectively,whilethecontrolgroupwasnot.Theliquidwaschangedevery3daysandthewholecultureprocesslastedfor7days.ThephasecontrastmicroscopyandTRAPstainingwereadoptedtoidentifyosteoclastlikecells.ResultsOnthe3rddaythemonocytesbegantofuseandonthe7thdaypositivemultinucleatedcellscouldbeseenwithTRAPstaining,butabsorptionpitwasnotformedonthedentinslices.Thegroupwith1α,25(OH)2D3hadthelargestnumberofosteoclastlikecells.ConclusionAfterthemonocytesinUCBareculturedby1α,25(OH)2D3,MCSF,PGE2induction,theycanturnintoTRAP(+)multinucleateosteoclastlikecells,the1α,25(OH)2D310-8mol/Lbeingthemosteffective.KEYWORDS:mononucleatedcellofumbilicalcordblood;osteoclast;cellculture;1α,25(OH)2D3;MCSF;PGE2破骨细胞(osteoclastcells,OC)是具有独特骨吸收功能的多核巨细胞，来源于造血细胞系，OC由单核细胞(mononucleatedcells,MNC)融合而成，不能增殖和传代。破骨样细胞(osteoclastlikecells,OLC)是指实验中原代培养或诱导生成的，具有OC性质，用于细胞学或分子生物学研究的细胞。OLC与OC的不同是前者用于实验研究，而后者位于骨改建部位。体外培养OC，在MNC融合的过程中，受到多种细胞因子以及产生这些细胞因子的细胞及其相关刺激的影响，研究表明：1α,25(OH)2D3、巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)、前列腺素E2(PGE2)等是OC分化发育的关键因子，可支持血缘性MNC向OC分化。Fujik